No abstract

Since 2012, lumpy skin disease virus (LSDV) has been spreading from the Middle East to south-east Europe and Russia. Although vaccination campaigns have managed to contain LSDV outbreaks, the risk of further spread is still high. The most likely route of LSDV transmission in short distance spread is vector-borne. Several arthropod species have been suggested as potential vectors, but no proven vector has yet been identified. To check whether promiscuous-landing synanthropic flies such as the common housefly (Musca domestica) could be involved, we carried out entomological trapping at the site of a recent LSDV outbreak caused by a vaccine-like LSDV strain. The presence of vaccine-like LSDV DNA was confirmed by the assay developed herein, the assay by Agianniotaki et al. (2017) and RPO30 gene sequencing. No evidence of field LSDV strain circulation was revealed. In this study, we discovered that M. domestica flies carried vaccine-like LSDV DNA (C > 25.5), whereas trapped stable flies from the same collection were negative for both field and vaccine LSDV. To check whether flies were contaminated internally and externally, 50 randomly selected flies from the same collection were washed four times and tested. Viral DNA was mainly detected in the 1st wash fluid, suggesting genome or even viral contamination on the insect cadaver. In this study, internal contamination in the insect bodies without differentiation between the body locations was also revealed; however, the clinical relevance for mechanical transmission is unknown. Further work is needed to clarify a role of M. domestica in the transmission of LSDV. To our knowledge, this is the first report demonstrating that an attenuated LSD vaccine strain has been identified in Russian cattle given the ban on the use of live attenuated vaccines against LSDV.

Summary Lumpy skin disease (LSD) has recently expanded its range northwards to include the Balkans, Turkey and Russia. Because there was no solid evidence conclusively verifying the transmission mechanism in the field and LSDV viraemic animals with overt and asymptomatic presentation of disease and their products may represent a risk as an indirect transmission pathway. In this work, we used PCR positivity and infectivity in clinical and subclinical infection to evaluate the safety of meat and offal products from cows infected with the virulent LSDV strain Russia/Dagestan/2015. At day 21 post infection, seven of the 12 animals developed the generalized disease, and four animals became subclinically infected without apparent clinical signs. Upon examination and necropsy, the animals with the generalized disease had skin lesions; noticeably enlarged lymph nodes; and lesions in the lungs, trachea and testicles; whereas subclinically ill animals exhibited only enlarged lymph nodes and fever. For both disease presentations, testing of skeletal meat by PCR and virus isolation showed that the skeletal meat did not contain live virus or viral genome, whereas in cattle with generalized disease, meat with gross pathology physically connected under the site of a skin lesion was positive for the live virus. In subclinical infection, only enlarged lymph nodes carried the infectious virus, while the other internal organs tested in both types of disease manifestation were negative except for the testicles. Overall, our findings demonstrate that clinically and subclinically infected animals are reservoirs of live LSDV in lymph nodes and testicles, whereas deep skeletal meat in both types of infection do not carry live virus and the risk of transmission through this product seems very low. The detection of LSDV in testicular tissues in subclinically ill animals is concerning because of the potential to spread infection through contaminated semen. This aspect requires reconsideration of surveillance programmes to identify these Trojan horses of LSDV infection.

No abstract

Интенсификация животноводства неизбежно повышает риски заноса и распространения инфекционных заболеваний, из которых наиболее опасны трансграничные. Инфекции крупного рогатого скота, вызываемые каприпоксвирусами, в частности вирусом заразного узелкового дерматита (ЗУД, Lumpy skin disease, LSD), поражают крупный и мелкий рогатый скоту, нанося существенный экономический ущерб. До 2015 года территория Российской Федерации была благополучна по ЗУД, однако из-за локальных конфликтов на Ближнем Востоке и изменений климата заболевание распространяется в северном направлении (масштабные вспышки LSD в Турции, странах Балканского полуострова, ЕС и в России). Широкое использование живых гомологичных вакцин против LSD в соседних странах также актуализирует разработку методов диагностики этого возбудителя, позволяющих выявлять геномы полевых изолятов и дифференцировать вакцинный вирус ЗУД КРС. Нами впервые в России разработан и валидирован комплекс методов ПЦР в режиме реального времени для однорежимного тестирования проб на наличие генома каприпоксвирусов, полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита и вакцинного вируса ЗУД КРС типа Neethling. На основе выравнивания полногеномных последовательностей идентифицированы сайты, наиболее пригодные для специфичной амплификации при выявлении генома полевых изолятов, вакцинных штаммов и каприпоксвирусов. Для амплификации фрагмента генома полевых изолятов мы выбрали участок ORF126 гена EEV вируса LSD-вставку размером 27 п.н., отсутствующую у других представителей рода Capripoxvirus и вакцинных штаммов типа Neethling. Для амплификации фрагмента генома вакцинных штаммов использовали участок ORF008, в котором присутствуют уникальные замены, характерные только для таких штаммов, для каприпоксвирусов-участок гена P32, консервативный для всех представителей рода Capripoxvirus. Предложенные методы показали высокую чувствительность (98 %), специфичность (99 %) и адекватную повторяемость (коэффициент вариации не более 2 %). Апробацию тест-систем проводили на панели из 596 проб биологического материала, собранного при вспышках каприпоксвирусных инфекций в России,-стабилизированной крови, сыворотки крови, соскобов кожи (нодулы), назальных и окулярных смывов, молока, тканей лимфатических узлов, легких, трахеи, селезенки и абортплодов, отобранных от животных, инфицированных в естественных условиях. Следует отметить, что с помощью разработанного комплекса тест-систем ПЦР-РВ в рамках мониторингового исследования на заразный узелковый дерматит в ряде регионов Российской Федерации отмечены случаи выявления генома вакцинного вируса ЗУД КРС. Это может свидетельствовать либо о нелегальном использовании запрещенной к ввозу в Россию аттенуированной живой вакцины типа Neethling, либо о естественном распространении вакцинного Neethling. На основе разработанных методов оформлено два патента РФ на изобретения, что подтверждает оригинальность и значимость предложенных методик для диагностических исследований. Ключевые слова: заразный узелковый дерматит, нодулярный дерматит, вакцинный штамм, каприпоксв...