Введение. Иммунохимическое изучение с помощью поликлональных антител триптофанил-тРНК-синтетазы быка (КФ 6.1.2, М г~ 120000, а 2 [1]) позволило обнаружить, что у этого белка антигенные детерминанты неравномерно распределены вдоль полипептидных цепей, а антитела к ним по-разному влияют на ферментативную активность [2]. Дальнейшее иммунохимическое изучение фермента было связано с получением гибридом и соответствующих моноклональных антител, обозначенных Ам1, Ам2 и АмЗ [3, 4]. Показано, что антигенная детерминанта для Ам1 и АмЗ локализована на фрагменте длиной-12000 с N-конца молекулы синтетазы [4], а для Ам2-на фрагменте длиной ~40000 с С-конца молекулы фермента [3]. Ам2, но не Ам1 и АмЗ, ингибирует реакции АТР-[ 32 Р]пирофосфатного обмена и аминоацилирования тРНК Тгр [3]. Методом иммуноблотинга показано, что антигенная детерминанта для Ам1 сохраняется в денатурирующих условиях и присутствует в триптофанил-тРНК-синтетазах эукариот, прокариот и архебактерий [5]. Поскольку эта антигенная детерминанта определяется линейной последовательностью аминокислот, цель настоящей работы сводилась к локализации эпитопа для Ам1, а также для Ам2 и АмЗ. Материалы и методы. Триптофанил-тРНК-синтетазу из поджелудочной железы крупного рогатого скота выделяли, как описано в [1]. Активность фермента определяли в реакции аминоацилирования тРНК Тгр [1]. Модификацию N Н 2-г рупп л и з и н о в ы χ остатков белка вели в боратпом буфере (0,2 Μ Н 3 В0 3 и 0,15 Μ NaCl, рН 8,7), добавляя 300-кратный по отношению к лизиновым остаткам молекулы фермента молярный избыток свежевозгнанного под вакуумом малеинового ангидрида. Ангидрид добавляли порциями при 4 °С в течение 1 ч, поддерживая рН реакционной смеси 5 н. NaOH в интервале 8,5-9,0 [6]. Избыток ангидрида удаляли гель-фильтрацией на колонке (1X45 см) с биогелем Р-2, уравновешенной 0,1 Μ NH 4 HC0 3 , рН 8,7. Полученный препарат лиофилизировали. Демалеирование NH 2-rpynn вели в 10 %-ной уксусной кислоте при 37 °С в течение 24 ч, после чего уксусную кислоту упаривали под вакуумом. Ограниченный протеолиз трипсином («Мегск», ФРГ) выполняли при весовом соотношении трипсин-синтетаза 1 : 100 [7]. Реакцию останавливали добавлением 100-кратного молярного избытка диизопропилфторфосфата по отношению к трипсипу. Исчерпывающий трипсинолиз нативной и модифицированной малеиновым ангидридом триптофапил-тРНК-сиптетазы проводили при весовом соотношении трипсинсинтетаза 1 : 75 в течение ночи при 37 °С в буфере, содержащем 0,2 Μ Н3ВО3 и 0,15 Μ NaCl, рН 8,7 [8]. Реакцию останавливали и демодификацию пептидов после конъюгирования с [ 125 1]-реагентом Болтона и Хантера осуществляли, как описано выше. Трипсинолиз в присутствии аминоациладенилата проводили, как описано в [9]. Далее гид