Реферат: Исследована экспрессия хромогранина А (ХрА) в хромаффинных клетках надпочечников новорожденных поросят после криоконсервирования. Фрагменты ткани надпочечников криоконсервировали с использованием 10% диметилсульфоксида и контролированной скорости охлаждения 1 град /мин до-80°С с дальнейшим погружением в жидкий азот. В качестве интактного контроля использовали незамороженные фрагменты. Ферментативным методом из фрагментов получали суспензию клеток, которую помещали в условия культивирования. Культуры клеток из интактных и криоконсервированных фрагментов представляли собой монослой с прикрепленными на нем мультиклеточными сфероидами (МС). Методом цитофлуориметрии с использованием антител к ХрА установлено, что количество ХрА-позитивных клеток в криоконсервированных образцах значимо не отличается от контроля ((31,1 ± 2,7) и (32,9 ± 3,6)% соответственно). Иммуноцитохимическим методом в обеих культурах на начальные сутки культивирования выявлены ХрА-позитивные клетки как в составе монослоя, так и в МС. В течение культивирования количество этих клеток значимо не отличалось, однако они перераспределялись: уменьшалось их содержание в монослое и увеличивалось в МС. Сходные относительное количество клеток с экспрессией ХрА и характер их распределения в обеих культурах свидетельствуют о том, что криоконсервирование фрагментов надпочечников в использованном режиме сохраняет основные структурно-функциональные свойства хромаффинных клеток. Ключевые слова: культура клеток надпочечников, мультиклеточные сфероиды, хромогранин А, криоконсервирование, хромаффинные клетки. Реферат: Досліджено експресію хромограніну А (ХрА) в хромафінних клітинах наднирників новонароджених поросят після кріоконсервування. Фрагменти тканини наднирників кріоконсервували з використанням 10% диметилсульфоксиду і контрольованої швидкості охолодження 1 град/хв до-80°С з подальшим зануренням у рідкий азот. У якості інтактного контролю використовували незаморожені фрагменти. Ферментативним методом із фрагментів отримували суспензію клітин, яку поміщали в умови культивування. Культури клітин з інтактних і кріоконсервованих фрагментів мали вигляд моношару з прикріпленими на ньому мультиклітинними сфероїдами (МС). Методом цитофлуориметрії з використанням антитіл до ХрА встановлено, що кількість ХрА-позитивних клітин у кріоконсервованих зразках значуще не відрізняється від контролю ((31,1 ± 2,7) і (32,9 ± 3,6)% відповідно). Імуноцитохімічним методом в обох культурах на початкову добу культивування виявлені ХрАпозитивні клітини як у складі моношару, так і в МС. Протягом культивування кількість цих клітин значуще не відрізнялася, однак вони перерозподілялися: зменшувався вміст у моношарі, але збільшувався у МС. Схожі кількість клітин із експресією ХрА та характер їх розподілу в обох культурах свідчать про те, що кріоконсервування фрагментів наднирників у використаному режимі зберігає основні структурно-функціональні властивості хромафінних клітин. Ключові слова: культура клітин надниркових залоз, мультиклітинні сфероїди, хромогранін А, кріоконсервування, ...
Хромогранин А (ХрА) относится к семейству кислых белков, которые составляют основной компонент секреторных гранул нейроэндокринных клеток. Изучение динамики экспрессии ХрА после криоконсервирования является актуальным, поскольку может выявить вероятные молекулярные перестройки клеток нейроэндокринной системы при действии холодовых факторов Цель работы -изучение экспрессии ХрА в первичной культуре надпочечников неонатальных поросят до и после криоконсервирования.Опыты проводили на надпочечниках поросят возраста Р 0 -Р 1 . Органы фрагментировали, при этом одну часть фрагментов криоконсервировали в криозащитной среде, содержащей 10% ДМСО и 90% DМЕМ/F12 со скоростью охлаждения 0,3 град/мин, вторую подвергали ферментативной обработке [О. Сидоренко и соавт., 2012] для получения первичной культуры клеток. Клетки культивировали на среде DМЕМ/F12 с 10% фетальной телячьей сыворотки и антибиотиками в течение 9 суток при 37°С, 5% СО 2 . По этому же методу получали первичную культуру из криоконсервированных фрагментов. Для цитофлуориметрического (ЦФ) и иммуноцитохимического (ИЦХ) анализов клетки фиксировали каждые трое суток. Для этого отдельно собирали флотирующие и растущие в виде монослоя клетки, окрашивали первичными кроличьими антителами к ХрA («Abcam», Великобритания) в разведении 1:200 и вторичными антикроличьими Alexa488-конъюгированными антителами («Abcam») в разведении 1:400. Анализ проводили на цитофлуориметре FACSCalibur («BD Biosciences», США). Данные ЦФ-анализа сравнивали с результатами, полученными при ИЦХ-анализе, для которого окрашенные антителами по стандартной методике культуры подвергали микроскопическому исследованию.В результате ЦФ-анализа установлено, что процентное содержание клеток, позитивно-меченных антителами к ХрА, не изменяется в процессе культивирования во флотирующей и прикрепленной фракциях интактной культуры, и в среднем составляет (51,9 ± 2,4) и (75,9 ± 11,5)% соответственно. Сходная динамика была характерна для криоконсервированной культуры, в которой содержание ХрА-позитивных клеток составляло в среднем (51,0 ± 5,3) и (67,5 ± 6,5)% соответственно. Визуальный анализ первичной культуры показал ее неоднородный состав: на монослое присутствовали прикрепленные мультиклеточные сфероиды. Результаты ИЦХ-анализа показали уменьшение содержание ХрА в монослое и повышение в составе МС в течение срока культивирования.Таким образом, криоконсервирование не оказывает значительного влияния на относительное количество клеток надпочечников, экспрессирующих ХрА in vitro. Качественное перераспределение ХрА-экспрессирующих клеток указывает на важность сохранения специфического микроокружения в первичной культуре надпочечников.Chromogranin A (ChrA) belongs to the family of acid proteins, which form the main component of the secretory granules of neuroendocrine cells. The study of the dynamics of ChrA expression after cryopreservation is relevant, because may indicate the probable molecular rearrangements of neuroendocrine system cells under the action of cold factors.The aim of the work was to study ChrA express...
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.
hi@scite.ai
10624 S. Eastern Ave., Ste. A-614
Henderson, NV 89052, USA
Copyright © 2024 scite LLC. All rights reserved.
Made with 💙 for researchers
Part of the Research Solutions Family.