Prolonged stability is a desired property for the biotechnological application of enzymes since it allows its reutilization, contributing to making biocatalytic processes more economically competitive with respect to chemical synthesis. In this study, we have applied selection by folding interference at high temperature in Thermus thermophilus to obtain thermostable variants of the esterase I from Pseudomonas fluorescens (PFEI). The most thermostable variant (Q11L/A191S) showed a melting temperature (Tm) of 77.3 ± 0.1°C (4.6°C higher than the wild‐type) and a half‐life of over 13 hr at 65°C (7.9‐fold better than the wild‐type), with unchanged kinetic parameters. Stabilizing mutations Q11L and A191S were incorporated into PFEI variant L30P, previously described to be enantioselective in the hydrolysis of the (−)‐enantiomer of the Vince lactam. The final variant Q11L/L30P/A191S showed a significant improvement in thermal stability (Tm of 80.8 ± 0.1°C and a half‐life of 65 min at 75°C), while retaining enantioselectivity (E > 100). Structural studies revealed that A191S establishes a hydrogen bond network between a V‐shaped hairpin and the α/β hydrolase domain that leads to higher rigidity and thus would contribute to explaining the increase in stability.
Se realizó durante el mes de octubre del 2020 la secuenciación del genoma de muestras autóctonas de SARS-CoV-2. Objetivo. Analizar in silico las mutaciones D614G en las secuencias aisladas en El Salvador. Metodología. Se analizaron secuencias utilizando la plataforma bioinformática SOPHiA-DDM-V5.7.10 para la determinación de las variantes por mutaciones con sentido erróneo. utilizando la plataforma Nexclade beta v0.8.1. se visualizó y comparo la proteína S silvestre (D614: PDB ID: 6VXX) y de la variante mutada (D614G: PDB ID: 6XS6). El modelamiento y generación de imágenes de los detalles moleculares de las proteínas se utilizó Pymol-v1.7.2.3. Resultados. El análisis de los cristales de la proteína S silvestre y mutada muestra diferencias a nivel molecular incluyendo la pérdida de interacciones entre el residuo G614 del dominio S1 y la treonina 859 de dominio S2, favoreciendo de esta manera la conformación abierta de la proteína S, la cual es necesaria para la interacción de S con el receptor ACE2.Conclusión. El predominio mundial de la D614G y las evidencias de laboratorio y bioinformáticas publicadas hasta la fecha, apuntan hacia una posible mayor infectividad y transmisibilidad conferida por la variante D614G detectada en las secuencias del SARS-CoV-2 en El Salvador.
Introducción. En este trabajo se describen las primeras secuencias completas del genoma de SARS-CoV-2 detectados a partir de muestras de pacientes salvadoreños. Objetivo. Reportar las primeras seis secuencias completas del genoma del SARS-CoV-2 de seis casos autóctonos de COVID-19 detectados en El Salvador, a partir de muestras de secreción nasofaríngea. Metodología. Se realizó una secuenciación de próxima generación NGS a partir de muestras autóctonas en la plataforma Illumina. Resultados. El análisis filogenético mostró que estos aislados pertenecen al clado 20C clado secundario de 20A que tiene en común la variante S:D614G, la mutación D614G de la glicoproteína espícula fue demostrada en las seis secuencias del genoma de SARS-CoV-2. En la plataforma GISAID las secuencias mostraron pertenecer al clado GH linaje pangolín B.1.2 y B.1.370, ambos linajes están presentes en Estados Unidos. Conclusión. Este es el primer reporte de secuencias completas del genoma de SARS-CoV-2 en El Salvador e identifica una variante predominante en Centro y Norte América.
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