In a previous study, we demonstrated that in rat striatal synaptosomes, methamphetamine (METH)-induced reactive oxygen species (ROS) production was prevented by methyllycaconitine (MLA), a specific antagonist of ␣7 neuronal nicotinic acetylcholine receptors (␣7 nAChR). The aim of this study was to test the influence of MLA on acute METH effects and neurotoxicity in mice, using both in vivo and in vitro models. MLA inhibited METH-induced climbing behavior by 50%. Acute effects after 30-min preincubation with 1 M METH also included a decrease in striatal synaptosome dopamine (DA) uptake, which was prevented by MLA. METH-induced neurotoxicity was assessed in vivo in terms of loss of striatal dopaminergic terminals (73%) and of tyrosine hydroxylase levels (by 90%) at 72 h post-treatment, which was significantly attenuated by MLA. Microglial activation [measured as 1-(2-chlorophenyl)-N-methyl-N-(1-methylpropyl)-3-isoquinolinecarboxamide binding] was also present at 24 h post-treatment and was fully prevented by MLA, tending to confirm its neuroprotective activity. MLA had no effect on METH-induced hyperthermia. Additionally, flow cytometry assays showed that METH-induced ROS generation occurs inside synaptosomes from mouse striatum. This effect implied release of vesicular DA and was calcium-, neuronal nitric-oxide synthase-, and protein kinase C-dependent. MLA and ␣-bungarotoxin, but not dihydro--erythroidine (an antagonist that blocks nAChR-containing 2 subunits), fully prevented METH-induced ROS production without affecting vesicular DA uptake. The importance of this study lies not only in the neuroprotective effect elicited by the blockade of the ␣7 nicotinic receptors by MLA but also in that it proposes a new mechanism with which to study METH-induced acute and longterm effects.
Palabras clave: Micronúcleos, atrazina, dicamba, índice mitótico RESUMEN El empleo de plaguicidas ha ido aumentando al paso del tiempo. A pesar de los beneficios aportados por los agroquímicos tanto en la agricultura como en el ámbito doméstico, muchos de ellos pueden representar peligros potenciales para la salud y el ambiente. En la actualidad es manifiesto el interés creciente en la determinación de biomarcadores que permitan la medición y estimación de una exposición activa y/o pasiva a contaminantes ambientales con capacidad tóxica, como los plaguicidas. Este estudio analiza el daño al ADN que causa el herbicida comercial Marvel® a través del ensayo de micronúcleos (MN), en células meristemáticas de la raíz de Vicia faba. Raíces de entre 2-3 cm fueron expuestas durante 4 horas, con 18 y 44 horas de recuperación a diferentes concentraciones de Marvel®, equivalentes a las siguientes combinaciones de atrazina/dicamba: 62.5/31.25; 125/62.5; 250/125; 1000/400; 2000/1000; 3000/1500 y 4000/2000 mg de ingrediente activo/L de agua destilada (mg I.A./L). Las células fueron expuestas a agua destilada, como testigo negativo y a dicromato de potasio 0.05%, como testigo positivo, bajo las mismas condiciones experimentales. Con excepción de la concentración más baja [62.5/31.25 mg I.A./L], todas las concentraciones probadas presentaron un daño significativo (p<0.05). Con respecto al testigo negativo, el daño fue mayor a las 18 horas de recuperación, al paso de 44 horas, el daño se vio disminuido en todas las concentraciones probadas. El índice mitótico (IM) también se modificó, mostrándose una menor división dependiente de la concentración y tiempo de recuperación. Las concentraciones de 2000/1000; 3000/1500 y 4000/2000, mg I.A./L, produjeron un daño mayor que el encontrado en el testigo positivo. Los datos sugieren que el herbicida comercial Marvel® produce daño al ADN y es citotóxico en Vicia faba.
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