A number of tert-butyl-substituted, cyclic, saturated and unsaturated diaminocarbene, diaminosilylene, and diaminogermylene compounds were investigated using inner shell electron energy loss spectroscopy (ISEELS) and ab initio calculations. These compounds, each of which contains a divalent group 14 element (C, Si, Ge), are of particular interest since they are stable indefinitely, and thus, they are readily accessible for detailed spectroscopic analysis. The C 1s and N 1s spectra of the hydrogenated tetravalent analogues of the saturated carbene, of di-tert-butyldiazabutadiene, and of di-tert-butyldiazabutane were also obtained to assist with spectral interpretation. Our analysis shows that there is significant π-allyl delocalization over the N−EII−N fragment in all three species. Further, in the unsaturated species there is additional aromatic delocalization. Both theory and experiment indicate that the divalent center of the carbene is qualitatively different from that in the germylenes or silylenes.

ZUSCHRIFTEN und jedes Napfchen wurde mit 100 pL 3,3',5,5'-TetramethyIbenzidin-Substrat (KPL, Gathersburg, MD, USA) versetzt. Nach drei Minuten wurde die colorimetrische Reaktion durch Zugabe von 100 pL l~ H,PO, pro Napfchen becndet, und die optische Dichte wurde bei 450 nm bestimmt. Alle NMR-Experimente wurden bei 25 "C mit einem Varian-UnityPlus-600-MHz-Spektrometer ausgefuhrt; es wurden suszeptibilitatsangepaflte NMR-Rohrchen (Shigemi) mit einem Probenvolumen von 220 pL vcrwendet. Die Probe enthielt 35 PM E-Selectin-Konstrukt und 1 7 5 0~~ des Sialyl-LewisX-Mimetikums 2 in lOOmM deuteriertem Imidazol (pH 7.4) und 1 mM CaCI, in D,O. Da jedes E-SelectinlhIgG-Molekul zwei Bindungsstellen fur Sialyl-LewisX enthalt, betrug das tatsachliche Verhaltnis Protein:Ligand 1:25. NOESY-Spektren wurden mit einem Spinlock-Filter [6] vor I, von 20 ms Dauer und 9 kHz Feldstarke aufgenommen. Die Repetitionszeit betrug 1.85 s. Die Spektren wurden mit 384 komplexen Punkten in f , und 32 Scans pro l,-lnkrement aufgenommen. Die Strukturrechnungen wurden mit dem Distanzgeometrie-Programm DGII (INSIGHTII, MSI) auf einer SGI-Workstation durchgefuhrt. 22 nichttriviale, von NOE-Daten abgeleitete Abstandsgrenzen wurden verwendet. Die Konformation der vier Kohlenhydratringe wurde fur das ungebundene Mimetikum 2 aus homonuclearen und heteronuclearen Kopplungskonstanten abgeleitet und durch Analyse von Transfer-NOE-Intensitaten fur gebundenes 2 plausibilisiert. Die Zuckerkonformationen wurden durch 36 Abstandsgrenzen zwischen Kohlenstoffatomen, die wcniger als 3 A im selben Ring auseinander liegen, fixiert. 50 Strukturen wurden rnit der Dreiecksbedingung geglattet und im vierdimensionalen Raum eingebettet. Die Strukturen wurden mit 10000 Simulated-Annealing-Schritten verfeinert. Dabei wurde die Molekulmasse mit dem Faktor 1000 multipliziert. Die Strukturen wurden dann in 250 Schritten energieminimiert (conjugate gradient). Die Summe der van-der-Waals-Radien wurde zur Einschrankung verwendet. Alle anderen nichtbindenden Wechselwirkungen wurden van den Rechnungen ausgeschlossen, um mogliche van Kraftfeldparametern hervorgerufene Artefakte zu eliminieren. Dadurch spiegelt die Strukturvielfalt im Ensemble der Strukturen tatsachlich die gemessenen Daten wider und ist nicht bloB eine Folge der Energieminirnierung. 19 berechnete Strukturen konvergierten zu Konformationen, die alle Abstandseinschrankungen innerhalb van 0.05 A erfullten. Der rmsd-Wert der Strukturen betrug 0.25 A fur dieSchweratome van Fucose, Galactose, (lR,2R)-1,2-Cyclohexandiol (cyc-2) und die Ca-C( 0)-Atome der (S)-Cyclohexylmilchsaure (cyc-1). Der rmsd-Wert fur alle Schweratome des Molekuls betrug 1.16 A.