The cecropin-melittin hybrid antimicrobial peptide BP100 (H-KKLFKKILKYL-NH2) is selective for Gram-negative bacteria, negatively charged membranes, and weakly hemolytic. We studied BP100 conformational and functional properties upon interaction with large unilamellar vesicles, LUVs, and giant unilamellar vesicles, GUVs, containing variable proportions of phosphatidylcholine (PC) and negatively charged phosphatidylglycerol (PG). CD and NMR spectra showed that upon binding to PG-containing LUVs BP100 acquires α-helical conformation, the helix spanning residues 3-11. Theoretical analyses indicated that the helix is amphipathic and surface-seeking. CD and dynamic light scattering data evinced peptide and/or vesicle aggregation, modulated by peptide:lipid ratio and PG content. BP100 decreased the absolute value of the zeta potential (ζ) of LUVs with low PG contents; for higher PG, binding was analyzed as an ion-exchange process. At high salt, BP100-induced LUVS leakage requires higher peptide concentration, indicating that both electrostatic and hydrophobic interactions contribute to peptide binding. While a gradual release took place at low peptide:lipid ratios, instantaneous loss occurred at high ratios, suggesting vesicle disruption. Optical microscopy of GUVs confirmed BP100-promoted disruption of negatively charged membranes. The mechanism of action of BP100 is determined by both peptide:lipid ratio and negatively charged lipid content. While gradual release results from membrane perturbation by a small number of peptide molecules giving rise to changes in acyl chain packing, lipid clustering (leading to membrane defects), and/or membrane thinning, membrane disruption results from a sequence of events - large-scale peptide and lipid clustering, giving rise to peptide-lipid patches that eventually would leave the membrane in a carpet-like mechanism.
Obrigada por sempre me incentivar a continuar. E também por me permitir conhecer e trabalhar com pessoas incríveis. Obrigada pela paciência. À Profª Dra. Katia Regina Perez Daghastanli, por me orientar, por sempre estar disposta a esclarecer minhas dúvidas e por me ensinar tudo muito direitinho! Por me ajudar na UNIFESP, pelas caronas e cafezinhos! Ao Prof o À Profª Dra Karin do Amaral Riske, por ter permitido a utilização do Laboratório de Membranas na UNIFESP, pela colaboração, disponibilidade e atenção. Pelas discussões, propostas e grande ajuda. Dr Hernan Chaimovich, pelo laboratório, leitura de relatórios e conselhos. Ao Prof o Marcelo Bemquerer e Magali Rodrigues pela síntese do BP100. Dr. Antonio de Miranda, pela grande ajuda, idéias e por ter permitido o uso do aparelho de dicroísmo circular. Aos meus amigos de laboratório Bianca, Catarina, Deborah, Gustavo, Filipe, Louise, Marcos, Vanessa e a técnica Márcia, que me acompanharam e me divertiram durante meus dias de mestrado. Às minhas amigas, com as quais cursei as disciplinas da pós-graduação, Cecília, Gabriela e Mariana que se tornaram grandes companheiras. À Tatiana da UNIFESP por ter me acompanhado e me ensinado a técnica do dicroísmo circular. Aos meus pais, minha avó e meu namorado, que sempre me apoiaram e estiveram comigo em todos os momentos. Pela alegria, conforto, confiança, carinho e por se dedicarem tanto a mim. Ao CNPQ, pela bolsa concedida para meu mestrado. À FAPESP e ao INCT-Cx (Instituto Nacional de Ciência e tecnologia de Fluidos Complexos), pelo financiamento do laboratório. Ao Laboratório de Sistemas Biomiméticos, por oferecer as condições necessárias para execução deste trabalho. "A felicidade não é a ausência de conflitos, é a habilidade para lidar com eles. " RESUMO Manzini, M. C. Efeito da Carga dos Lipídios na Interação do BP100 em Modelos de Membrana,
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