The objective of this study was to evaluate the effect of retinol (RT) and retinoic acid (RA) on the in vitro development of pre-implantation goat embryos cultured in potassium simplex optimized medium or synthetic oviduct fluid or cocultured in oviductal cells monolayer either in potassium simplex optimized medium or synthetic oviduct fluid. A total of 2407 cumulus-oocyte complexes were aspirated from 2 to 6 mm ovarian follicles from slaughtered animals. Selected cumulus-oocyte complexes were subjected to in vitro maturation in TCM 199 for 24 h at 39 °C in an atmosphere of 5% (v/v) CO(2) in humidified air. In vitro fertilization was performed in modified defined medium. Eighteen hours after in vitro fertilization, cumulus cells were removed and presumptive zygotes were randomly distributed into experimental groups. In Experiment 1, presumptive zygotes were cultured in potassium simplex optimized medium, potassium simplex optimized medium + RT, potassium simplex optimized medium + retinoic acid, synthetic oviduct fluid, synthetic oviduct fluid + RT and synthetic oviduct fluid + RA at 39 °C in a humidified atmosphere of 5% (v/v) CO(2), 5% (v/v) O(2) and 90% (v/v) N(2). In Experiment 2, presumptive zygotes were cocultured in potassium simplex optimized medium + oviductal cells monolayer, potassium simplex optimized medium + RT + oviductal cells monolayer, potassium simplex optimized medium + RA + oviductal cells monolayer, synthetic oviduct fluid + oviductal cells monolayer, synthetic oviduct fluid + RT + oviductal cells monolayer and synthetic oviduct fluid + RA + oviductal cells monolayer in an atmosphere of 5% (v/v) CO(2) in humidified air. In both experiments, media were partially changed on day 2 after in vitro fertilization and unfertilized oocytes were excluded from the experiment. Embryos were cultured or cocultured for 8 days. In Experiment 1, there was no effect of RT or RA supplementation on the proportion of oocytes that reached the morula or blastocyst stages. By contrast, Experiment 2 demonstrated that the addition of 0.28 μg/ml RT and 0.5 μm RA to the embryo culture media stimulated (p < 0.05) development to the morula and blastocyst stages under the coculture conditions tested. In conclusion, retinoids play an important role in pre-implantation development of goat embryos and can be used to enhance in vitro embryo production.
This study evaluated the influences of nitrogen fertilizer and energy supplementation cattle on the growth performance of beef cattle. This study was conducted at the Federal University of Technology of Paraná, Dois Vizinhos through continuous grazing on 6.3 ha, divided into nine paddocks. The treatments were: Alexander grass +100 kg ha of N (N100); Alexander grass + 100 kg ha of N + 0.5 kg per 100 kg of weight live supplementation of wheat bran (N100S); and Alexander grass +200 kg ha of N (N200), with an average herbage allowance of 10% for all treatments. Crossbred and non-castrated steers with an average weight of 276 ± 41 kg were used for 107 days. The crude protein from entire plant differed (P < 0.05) between treatments, with the greater value (14.8%) occurring in the N200, and the lesser value (13.3%) occurring in the N100S. The herbage accumulation rate was greater (P < 0.05) in the N200 (55.7 DM ha d) than that in the N100S and N100 (40.0 and 39.7 kg DM ha d, respectively). The N100S produced greater (P < 0.05) average daily weight gains (0.815 kg animal day) than did the N200 (0.685 kg animal day) and N100 treatments (0.727 kg animal day).
O objetivo do presente estudo foi de avaliar a amplitude da variação de pH em meios de maturação e de cultivo embrionário, com diferentes concentrações do tampão HEPES. Inicialmente, foi determinado o efeito de diferentes concentrações de HEPES (0, 12,5 e 25,0mM) na variação do pH dos meios de maturação (TCM-199 modificado) e desenvolvimento embrionário (KSOM modificado) em meio ambiente, à temperatura de 25ºC, e na estufa, em uma atmosfera de 5% de CO2 em ar a 39ºC. Em um segundo experimento, os oócitos foram maturados em TCM-199 modificado sem HEPES (142 oócitos) ou com 25,0mM de HEPES (137 oócitos) e foi avaliado índice de blastocisto. O meio Fert-TALP foi utilizado para a fecundação, sendo que os embriões foram co-cultivados com células epiteliais de oviduto (CEO) em KSOM modificado com 10% de SFB. Um terceiro experimento foi delineado para determinar a importância da presença do HEPES no meio de cultivo embrionário sobre o desenvolvimento de embriões bovinos in vitro. Para isso, após a retirada do cumulus, os zigotos foram divididos ao acaso e co-cultivados com CEO em KSOM modificado (com 10% de SFB) sem HEPES (grupo controle; n = 95) ou com 25,0mM de HEPES (grupo HEPES; n = 92). Foram mantidos em cultivo somente os embriões com duas ou mais células, sendo considerados desenvolvidos os que atingiram o estádio de blastocisto expandido (Bx), 7 e 9 dias após inseminação. O cultivo dos oócitos e embriões, em ambos os experimentos, foi efetuado em estufa a 39ºC, com uma atmosfera contendo 5% de CO2 e umidade saturada. Os resultados mostram que os meios contendo 25,0mM de HEPES foram mais eficientes em minimizar a variação do pH que os meios com 12,5mM ou sem HEPES. Além disso, a adição de HEPES ao meio de maturação aumentou os índices de Bl sobre o total de oócitos e sobre o total de clivados (21,9% e 42,86%) com relação ao controle (10,56 e 16,67%; p<0,05). Na determinação da importância do HEPES no desenvolvimento embrionário, o grupo HEPES apresentou índices superiores de Bx (45,65%) em relação ao controle (11,58%; p<0,01). A uniformidade dos resultados foi um dos aspectos positivos observados quando o HEPES estava presente no meio de cultivo embrionário. Portanto, o uso do HEPES, durante a maturação e o cultivo embrionário, é recomendável para o aumento da produção de embriões in vitro com maior repetibilidade.
Este trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o sêmen ovino criopreservado com etileno glicol em relação ao glicerol, quanto à motilidade progressiva e vigor e, especialmente, quanto à integridade das membranas plasmática, nuclear e mitocondrial. Foram utilizados ejaculados de sêmen provenientes de dois carneiros da raça Ile-de-France, com padrões mínimos de volume (0,5ml), turbilhonamento (2 de 0-5), motilidade progressiva (65%), vigor (3 de 0-5), aspecto (cremoso fino, 3x10(6) espermatozóides/mm3) e células normais (80%). Um total de 25 pools foi dividido em duas alíquotas, as quais foram, posteriormente, congeladas com etileno glicol a 0,5M ou glicerol a 0,72M em pellets. Os parâmetros utilizados, para avaliar o desempenho dos crioprotetores, foram a motilidade progressiva, vigor espermático e integridade do acrossomo e das membranas plasmáticas dos espermatozóides. A motilidade e vigor foram aferidos no sêmen fresco, resfriado, descongelado, mantido a 38°C por 5 horas de incubação (TTL- teste de termorresistência lento) e à temperatura de 45°C por 30 minutos (TTR- teste de termorresistência rápido). Não houve diferença entre o etileno glicol e o glicerol para a avaliação da morfologia do acrossomo, motilidade progressiva e vigor. As células espermáticas criopreservadas com etileno glicol apresentaram maior integridade das membranas plasmática, nuclear e mitocondrial do espermatozóide. O etileno glicol é mais eficiente do que o glicerol para preservar a integridade das membranas espermáticas na congelação de sêmen ovino.
O presente trabalho teve como objetivos determinar a influência de células ovarianas no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais, avaliar a viabilidade das células ovarianas em monocamada e a influência do soro na manutenção de folículos pré-antrais in vitro. Folículos pré-antrais (FPs) e células ovarianas foram isolados de ovários de fetos bovinos, com idade entre 6 e 8 meses de gestação, oriundos de matadouro. Células ovarianas em monocamada foram cultivadas em meio TCM-199, e a viabilidade celular, após o cultivo na presença ou ausência de FSH, foi determinada com o corante vital azul de tripan. FPs foram distribuidos em quatro tratamentos e cultivados em TCM-199 modificado, contendo soro de novilho castrado (SNC), SNC em monocamada de células ovarianas (MCO), MCO com FSH ou meio definido com álcool polivinílico (PVA) como macromolécula. A viabilidade celular não foi afetada em conseqüência da presença ou ausência de FSH. No entanto, houve um incremento significativo no tamanho dos FPs cultivados na presença de SNC, MCO e FSH (P<0,05), o que não foi observado nos demais tratamentos. A adição de FSH ao meio de cultivo não influencia a viabilidade de células ovarianas ao longo de 20 dias. Folículos pré-antrais, com área superficial entre 4000 e 8000mim², mas não folículos com área superficial superiores a 8000mim², crescem in vitro na presença de células ovarianas, independentemente da presença de FSH.
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