Se evaluó el efecto de la adición de melatonina (Mt) en el medio de maduración y/o de vitrificación de ovocitos bovinos sobre clivaje y posterior desarrollo embrionario. Los complejos ovocito-células del cúmulo (COCs) fueron obtenidos de vacas criollas mediante la técnica de aspiración transvaginal guiada por ultrasonografía (OPU) y de ovarios de matadero (OM). Del pool de ovocitos obtenidos de ambas fuentes se seleccionaron los que tenían citoplasma homogéneo y tres o más capas compactas de células del cúmulo. Los COCs seleccionados fueron asignados aleatoriamente a cinco tratamientos: T1, madurados con Mt y vitrificados sin Mt; T2, madurados y vitrificados con Mt; T3, madurados sin Mt y vitrificados con Mt; T4 (control) madurados y vitrificados sin Mt; T5, madurados sin Mt y no vitrificados. La concentración de Mt en los medios de maduración y vitrificación fue de 0.01 μM (10-9 M). Los ovocitos fueron madurados, vitrificados, fecundados y los presuntos cigotos cultivados hasta el día 7 pos-fecundación in vitro. Los datos fueron analizados por regresión logística. Independientemente del origen de los ovocitos, el porcentaje de clivaje (PC) y de producción de embriones (PIV) fue similar entre tratamientos. El PC en los ovocitos de OPU fue mayor en T4, y la PIV fue similar entre tratamientos. En los de OM, los resultados no variaron entre tratamiento en PC y PIV. En conclusión, la Mt redujo el PC en ovocitos colectados por OPU, mientras que no afectó la PIV. En los colectados de OM la adición de Mt no afectó el PC ni la PIV
In the Ecuadorian Andes there is a Creole bovine biotype whose population is disappearing. In vitro embryo production and cryopreservation is an important biotechnology that allows the conservation of animals threatened with extinction. The objective of this study was to determine the in vitro production and cryopreservation of embryos from creole heifers raised in the highlands of Ecuador. Immature cumulus-oocyte complexes were retrieved by ovum pickup from 10 Creole heifers (OPU) and from abattoir ovaries (control). The experiment was completed within 8 replicates. Cumulus-oocyte complexes were cultured in a maturation medium (TCM-199 supplemented with 10% fetal bovine serum, 100µg mL−1 of sodium pyruvate, 0.75mg mL−1 of l-glutamine, 4µg mL−1 of FSH-p, 100µM cysteamine, and 250µg mL−1 of gentamicin) following IVF (SOF medium supplemented with 10µg mL−1 heparin) and in vitro culture (citrate SOF medium). After denudation (Day 1 after IVF), presumptive embryos from each oocyte source (OPU and control) were split into 2 groups: with (FCS+) and without (FCS−) FCS (2.5%), which was added on Day 5 after IVF. On Day 7, embryos were evaluated, and those with quality 1 were vitrified. After warming, embryo re-expansion at 2h and embryo re-expansion and hatching at 24 and 48h were evaluated. Data were analysed by logistic regression in SAS software (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Results of embryo rate at Day 7 and rates of vitrified, re-expanded, and hatched embryos are shown in Table 1. Regardless of the oocyte source, the addition of 2.5% FCS decreased embryo re-expansion at 2h and reduced embryo hatching at 48h in the OPU group. In conclusion, FCS did not improve embryo production and adversely affected the cryotolerance of embryos produced in vitro from Ecuadorian creole heifers.
Table 1.Production and cryotolerance of in vitro bovine embryos
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