RESUMOEstudou-se o efeito da concentração espermática e período de incubação e da interação dessas características sobre a fecundação in vitro (FIV) usando-se sêmen de touros Guzerá. Oócitos (n=1146) maturados in vitro foram divididos em tratamentos objetivando a FIV, em esquema fatorial 3×2×2 (três touros -A, B e C, duas concentrações espermáticas -2 e 4×10 6 espermatozóides/ml e dois tempos de incubação 12 e 18 horas). Utilizaram-se espermatozóides viáveis obtidos por swin-up. A FIV foi realizada em meio fert-talp com heparina, em incubadora com 5% de CO 2 e 95% de umidade, a 38,5°C. Após incubação, 50% dos oócitos foram fixados e corados para determinação das taxas de penetração, fecundação monoespermática e poliespermia. O restante foi co-cultivado com células da granulosa em meio CR2aa por oito dias, avaliando-se a taxa de clivagem e a produção de blastocisto. Houve maior taxa de penetração (P<0,05) na concentração de 4×10 6 espermatozóides/ml por 18 horas (64%), e não se observou diferença (P>0,05) entre os demais tratamentos. A taxa de poliespermia foi maior (P<0,05) na concentração espermática de 4×10 6 , independente do tempo de incubação. Na concentração espermática mais alta, a taxa de poliespermia foi maior no tempo de incubação de 18 horas (P<0,05). O touro A apresentou menor (P<0,05) taxa de poliespermia em relação aos demais. Ainda, no touro A a taxa de clivagem foi maior (P<0,05) que no touro B, enquanto o C mostrou-se semelhante tanto ao A quanto ao B. O tempo de incubação, a concentração espermática e a interação das variáveis influenciaram as taxas de penetração e poliespermia, sem interferir na taxa de fecundação monoespermática e na produção de blastocistos.Palavras-chave: bovino, Guzerá, fecundação in vitro, concentração espermática, tempo de incubação ABSTRACTThe effects of sperm concentration, incubation period and their interaction on in vitro fertilization (IVF) using sperm of Guzera bulls were evaluated. In vitro matured oocytes (n=1146) were allotted to IVF treatments in a factorial scheme 3×2×2 -three bulls (A, B and C)
O teste de adesão espermática heterólogo (espécies diferentes doadoras de gameta masculino e feminino) in vitro, apesar de ser sensível para determinação da fertilidade, conta com meios e sistemas de incubação onerosos. Assim, o objetivo deste trabalho foi simplificar o teste de adesão espermática heterólogo in vitro, avaliando a viabilidade de utilização do Meio M2 em banho maria a 39 oC frente ao meio KRB em estufa de CO2 a 5% (método original). Os ovócitos foram obtidos de leitoas pré-púberes, com diâmetro folicular entre 3-6 mm, selecionados e desnudados por sucessivas pipetagens. Os espermatozoides foram obtidos através do corte da cauda epididimária de ratos Wistar adultos. A concentração final no meio de fertilização foi de 1x106 espermatozoides/mL. Em cada tratamento foram utilizados pools de 30 ovócitos para cada macho. O grupo controle foi incubado em meio de Krebs-Ringer bicarbonato (KRB) e em incubadora de CO2 a 5%, e no grupo tratado (T1) o meio foi M2 (Sigma, M7167) com HEPES e albumina sérica bovina (BSA) e incubado em banho-maria a 39 °C. A co-incubação (espermatozoides/ovócito) foi realizada por 2 h a 37 °C. A adesão foi avaliada por exposição dos ovócitos a uma solução de Hoescht 33342 em PBS e incubados a 37 °C/15 min, seguido de avaliação em microscópio de epi-fluorescência em aumento de 400X. A taxa de adesão de espermatozoides no ovócito, no grupo controle e T1, não diferiram estatisticamente, foram de 23,5±3,9% e 24,7±4,2%, respectivamente. Também não foi observada diferença significativa entre os tratamentos para o número de espermatozoides/ovócito (Controle = 0,9±0,1 e T1 = 0,8±0,1) (p>0,05). Estes resultados demonstraram que o método simplificado (T1) não interfere nos resultados do teste de adesão espermática. Desse modo, o teste de adesão espermática pode ser simplificado com a utilização do banho-maria, sem que ocorram alterações nas taxas de adesão e polispermia.
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