The effect of dietary protein on the expression of histidase (Hal) was investigated to understand the mechanism of induction of histidase by a high protein diet. In this study, we examined the following: 1) the effect of 0, 6, 18, 35 and 50% casein diets on hepatic and epidermal Hal activity, amount of the enzyme and Hal-mRNA; 2) the effect of a high histidine diet (1.25%) on Hal expression; 3) the response of Hal expression in rats fed a 10% casein diet and injected with glucagon (0.6 mg /(100 g body wt.d); and 4) the half-lives of the enzyme and Hal-mRNA in rats fed an 80% casein diet for 7 d followed by a protein-free diet. Hal activity increased as the protein content in the diet increased (r = 0.986, P < 0.001) and was associated with a significant increase in Vmax without a change in Km. The dietary regulation was liver specific because skin Hal was unresponsive. Increments in hepatic Hal activity were accompanied by concomitant significant increases in the amount of histidase and its mRNA. The response was more pronounced in rats fed diets containing >18% casein. Rats fed a 12% casein diet containing 1.25% histidine did not have different Hal activity and mRNA levels compared with rats fed a 12% casein diet, indicating that Hal expression is not modified by its substrate. Injection of glucagon into rats fed the 10% casein diet increased Hal activity threefold and Hal- mRNA expression fivefold compared with uninjected rats fed the same diet. The apparent half-life of hepatic histidase in protein-depleted rats previously fed an 80% casein diet was 2.8 d, whereas the half-life of Hal-mRNA was 17 h. In summary, these data support the hypothesis that Hal expression is regulated by dietary protein at the pretranslational level in rat liver, and that glucagon is one of the hormones involved in the induction of Hal.
En el presente estudio se realizó la validación de una metodología analítica por cromatografía líquida de alta eficiencia con detector de arreglo de diodos (HPLC-DAD) para la cuantificación del ácido benzoico en complejos polielectrolíticos, obtenidos con Eudragit® E100. Para ello se evaluaron las características de desempeño determinando que la metodología es selectiva; lineal en el rango de concentraciones de 2 a 10 μg/mL; precisa con un RSD inferior a un 2%; exacta con un porcentaje de recuperación de un 98,7% y se establecieron límites de cuantificación (LOQ) de 0,72 y de 1,56 μg/mL para el sistema y método respectivamente. De acuerdo a estos resultados, la metodología analítica es adecuada para evaluar la permeación in vitro, del ácido benzoico incluido en los complejos polielectrolíticos a través de piel porcina, empleando celdas de Franz.
Las celdas de Franz son una de las herramientas para evaluar la permeación transepitelial de compuestos mediante la realización de ensayos in vitro, estos permiten inferir el comportamiento de seguridad de un compuesto en la piel. El objetivo de esta investigación fue determinar el comportamiento de permeación del ácido benzoico a partir de complejos con polielectrolitos () en comparación con el ácido benzoico sin complejar, para inferir su comportamiento de seguridad. En una primera fase, se establecieron las condiciones de almacenamiento de la piel comparando los parámetros de difusión (flujo y constante de permeación) y pérdida de agua transepitelial, empleando piel de orejas de cerdos recién sacrificados, almacenadas en NaCl 1M a -2°C por 3 días; se trabajó bajo condiciones de dosis infinitas. Posteriormente, se realizó el ensayo de permeación de dos complejos entre ácido benzoico y Eudragit E, en comparación con el ácido benzoico, bajo condiciones de dosis finitas. La cuantificación del ácido benzoico fue realizada con un método analítico validado por HPLC-DAD. Los resultados evidenciaron que las muestras biológicas pueden almacenarse durante 72 h en las condiciones descritas. El comportamiento de permeación del ácido benzoico complejado respecto al ácido benzoico libre demostró tener un mejor perfil de seguridad, puesto que hubo una menor permeación para el primer caso. Estos resultados demuestran que la complejación del ácido benzoico podría disminuir las reacciones de sensibilidad que normalmente este presenta, basándose en la disminución de su permeación.
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