Trehalase activities at pH 5 (not inhibited by EDTA) and pH 7 (inhibited by EDTA) were present in the soluble fraction of disintegrated commercial baker's yeast. The pH 5 activity binds strongly to concanavalin A, is only partially salted out by saturated (NH4)2SO4, has an apparent Mr of 215000 (by gel filtration) and is an acidic protein. It has a Km of 1.4 mM, a broad pH optimum (at 40 mM-trehalose) between pH 4 and 5, and is activated by about 30% by 20-300 mM neutral salts such as KCl, NaNO3 and MnCl2. The enzyme is strongly inhibited by acetic acid/acetate buffers, with a Ki of about 15 mM-acetic acid. The pH 7 activity does not bind to concanavalin A, is salted out at 20-32% (w/v) (NH4)2SO4 and has an Mr of 170000 (by gel filtration). It is absolutely dependent on Ca2+ or Mn2+ ions (Mg2+ is ineffective) and strongly inhibited by neutral salts in the 20-100 mM range. It can be activated by treatment with MgATP in the presence of cyclic AMP. Activation decreases, but does not abolish, the Ca2+ requirement, and does not change the Km for trehalose (5.7 mM) or shift the sharp pH optimum at pH 6.7 (at 40 mM-trehalose).
1. Adenylate cyclase of Saccharomyces cerevisiae was sedimented from mechanically disintegrated preparations of yeast over an unusually wide range of centrifugal forces. 2. The enzyme was readily solubilized by Ficoll and by Lubrol PX. Lubrol caused a 2-fold activation. 3. Both particle-bound and Lubrol-solubilized enzyme had an apparent Km for ATP of 1.6 mM in the presence of 0.4 mM-cyclic AMP and 5 mM-MnCl2 at pH 6.2 and 30 degrees C. 4. The Lubrol-solubilized enzyme behaved on gel filtration as a monodisperse protein with an apparent mol.wt. of about 450000.
The Michaelis constant of membrane-bound adenylate cyclase increased from 1.1 to 1.8 mM between 7 and 38 degrees C (delta H = 13 kJ/mol). Over this temperature range, the maximum velocity increased 10-fold, and the Arrhenius plot was nearly linear, with an average delta H* of 51 kJ/mol. The temperature-dependence of the reaction rate at 2 mM-ATP was examined in more detail: for Lubrol-dispersed enzyme, Arrhenius plots were nearly linear with average delta H* values of 45 and 68 kJ/mol, respectively, for untreated and gel-filtered enzymes; for membrane-bound enzyme, delta H changed from 40 kJ/mol above about 21 degrees C to 62 kJ/mol below 21 degrees C, but this behaviour does not necessarily indicate an abrupt, lipid-induced, transition in the reaction mechanism.
MMM:n johtama viljojen turvallisuustietojen seuranta vuosina 1999 – 2006 toteutti kansallisen viljastrategian päämääriä. Viljastrategiassa korostettiin viljantuotannon kannattavuuden ja kilpailukyvyn parantamista, laadun kehittämistä ja lisäarvon luontia laatuketjuun. Turvallisuustietoseuranta kohdistui viljojen hometoksiineihin, raskasmetalleihin ja torjunta-ainejäämiin. Pääasiassa seurantatutkimus keskittyi viljojen Fusarium -toksiineihin. Tutkimus toteutettiin Eviran, Pro Agrian ja MTT:n yhteistyönä. Turvallisuustietoseurannan keskeisiä tavoitteita oli hometoksiinipitoisuuksien seurannan lisäksi viljanäytteiden viljelytekniikka- ja viljelyolosuhdetietojen ja hometoksiinipitoisuuksien syy-seuraussuhteiden analysointi. Näytteiden taustatietoja kerättiin koko tutkimuksen ajan maalajeista, lajikkeista, typpilannoituksesta, siemenen laadusta, esikasveista, viljelykierrosta, kasvinsuojelutoimenpiteistä, kasvuajasta, korjuukosteudesta, kuivauksesta ja sadon määrästä. Turvallisuustietoseurannan tulosten perusteella kevätviljat olivat alttiimpia Fusarium -sienten tartunnalle ja toksiinien muodostumiselle. Syysviljojen hometoksiinipitoisuudet olivat koko seuranta-jakson hyvin alhaisia ja pääasiassa alle määritysrajojen. Kaikista tutkituista viljanäytteistä (991 kpl) vuosina 1999 – 2006 EU -raja-arvon ylittäviä pitoisuuksia DON:n osalta oli 18 kpl. Mikäli tarkastellaan ainoastaan kauranäytteiden DON -pitoisuuksia, raja-arvon 1750 µg/kg ylityksiä oli 11 kpl tutkituista 279 näytteestä. Kauranäytteistä lastenruoan raja-arvon 200 µg/kg alittavia näytteitä oli 164 kpl. Kaura oli viljoistamme selvästi herkin Fusarium -tartunnalle ja toksiinien muodostumiselle. Lisäksi rehuohralla ja kevätvehnällä havaittiin raja-arvon ylityksiä. Hometoksiinien hallinnassa tärkeintä oli siemenen kunnostus ja peittaus, viljelykierto, sadonkorjuun ajoitus ja viljan kuivaus. Myöhäinen lajike lisäsi toksiiniriskiä, koska kasvukauden venyminen pitkälle loppukesään lisää epävarmuutta sadonkorjuuajan säästä. Lakoontuneessa kasvustossa riski hometoksiinien muodostumiseen kasvoi. Viljan huolellinen lämminilmakuivaus alle 14 %:iin myös hyvinä vuosina oli parhaita keinoja hallita hometoksiiniriski. Turvallisuustietoseurannan tuloksia hyödynnettiin monin eri tavoin viljaraaka-aineen turvallisuutta arvioitaessa, viljan hyvät tuotanto- ja varastointitavat ja punahomeet viljassa -oppaassa, yritysten omavalvonnassa, neuvonnassa, valvonnassa, riskin arvioinnissa ja uusien tutkimuskohteiden valin-nassa. Fusarium -toksiinien seurannasta muodostui aikavälillä 1999 – 2006 vilja-alan toimijoiden yhteinen hanke, joka jatkuu edelleen ja kehittyy asiakkaiden tarpeiden mukaan.
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.
hi@scite.ai
10624 S. Eastern Ave., Ste. A-614
Henderson, NV 89052, USA
Copyright © 2024 scite LLC. All rights reserved.
Made with 💙 for researchers
Part of the Research Solutions Family.