Paracoccidioidomycosis is a systemic granulomatous disease caused by Paracoccidioides spp. A peptide from the major diagnostic antigen gp43, named P10, induces a T-CD4(+) helper-1 immune response in mice and protects against intratracheal challenge with virulent P. brasiliensis. Previously, we evaluated the efficacy of the P10 peptide alone or combined with antifungal drugs in mice immunosuppressed and infected with virulent isolate of P. brasiliensis. In the present work, our data suggest that P10 immunization leads to an effective cellular immune response associated with an enhanced T cell proliferative response. P10-stimulated splenocytes increased nitric oxide (NO) production and induced high levels of IFN-γ, IL-1β and IL-12. Furthermore, significantly increased concentrations of pro-inflammatory cytokines were also observed in lung homogenates of immunized mice. P10 immunization was followed by minimal fibrosis in response to infection. Combined with antifungal drugs, P10 immunization most significantly improved survival of anergic infected mice. Administration of either itraconazole or sulfamethoxazole/trimethoprim together with P10 immunization resulted in 100 % survival up to 200 days post-infection, whereas untreated mice died within 80 days. Hence, our data show that P10 immunization promotes a strong specific immune response even in immunocompromised hosts and thus P10 treatment represents a powerful adjuvant therapy to chemotherapy.

Paracoccidioidomycosis is a granulomatous systemic mycosis endemic in Brazil and other Latin America countries. A DNA vaccine encoding the immunoprotective peptide 10 (P10) significantly reduced the fungal burden in mice when given prior to or after intratracheal challenge with Paracoccidioides brasiliensis. Presently, the generation/expansion of CD4+ CD44hi memory T cells as well as Foxp3+ Treg cells in mice immunized with the DNA vaccine (pcDNA3-P10) before and after infection with P. brasiliensis was investigated. Memory CD4+ CD44hi T cells simultaneously with Foxp3+ Treg cells increased in the spleens and lungs of pcDNA3-P10 immunized mice on day 0, 30, 60 and 120 postinfection. Histopathology of the lung tissue showed minimal inflammation in immunized mice compared with the unimmunized group, suggesting a role for regulatory T cells in controlling the immunopathology. The DNA vaccine shows that the repeated immunization generates memory cells and regulatory T cells that replace the initially protective pro-inflammatory T cells conferring a long term protection while preserving the integrity of the infected tissue.

Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico patogênico agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica de caráter granulomatoso endêmica no Brasil e em outros países da América Latina, ocupando o décimo lugar dentre as doenças infecto-parasitárias que mais causam morte no Brasil. A busca por alternativas para reduzir o tempo de tratamento da PCM, levou ao desenvolvimento de uma vacina de DNA contendo a sequência do peptídeo P10 de P. brasiliensis. Este peptídeo foi capaz de conferir proteção em modelo experimental de PCM. Levando-se em consideração que este peptídeo induz uma proliferação de células T, torna-se necessário avaliar se a inflamação mais exacerbada provocada nestes animais também leva a um aumento na geração de células T reguladoras e se esta vacina é capaz de gerar células T de memória. Neste trabalho, avaliamos a geração dessas populações de células T em animais imunizados com o vetor contendo o inserto P10 de P. brasiliensis antes e após o desafio com o fungo. Para este propósito, esplenócitos de camundongos imunizados e desafiados foram submetidos a um ensaio de proliferação celular com estímulo do peptídeo P10 e, em seguida, imunofenotipados por citometria de fluxo usando os seguintes marcadores CD4 e CD44 para células T de memória, CD4 e Foxp3 para células T reguladoras e RORγt, marcador para células Th17. Linfócitos pulmonares desses camundongos também foram avaliados por citometria de fluxo. Nossos resultados indicam um aumento do percentual de células T reguladoras e de memória no baço e nos pulmões de camundongos imunizados antes e depois de 30, 60 e 120 dias do desafio em comparação com os grupos controle e não imunizado. A análise histopatológica demonstrou tecido pulmonar menos inflamado em camundongos imunizados comparando com o grupo não tratado, sugerindo um papel das células T reguladoras na prevenção da imunopatologia. Outro experimento revelou que o modelo experimental da PCM in vivo é capaz de induzir a expressão de RORγt. Este estudo indica que nossa vacina de DNA contra a PCM gera células com um fenótipo de reguladoras e de memória, caracterizando seu potencial para o tratamento desta micose.