No abstract

The -thioketosides of methyl 5-acetamido-4,7,8,9-tetra-O-acetylneuraminate with thioacetic acid, thiophenol, 4-nitrothiophenol, 4-aminothiophenol, 2-mercaptopyridin and mercaptobenzothiazol as aglycones were synthesized by phase-transfer catalysis in good yields. The methyl 5-acetamido-4,7,8,9-tetra-<9-acetyl-2-thioacetylneuraminate is the analogous thio compound to the methyl 5-acetamido-2,4,7,8,9-penta-O-acetylneuraminate and can be used as intermediate for preparing S-ketosides of NeuSAc. By Zemplen saponification and mild hydrolysis of the methyl-ester group the free Neu5Ac-a-thioketosides with thiophenol, 4-nitrothiophenol, 4-aminothiophenol and 2-mercaptopyridin could be prepared. These ketosides were found to be inhibitors of C. perfringens sialidase with K-values between 2.3mM and 6.6mM. The free Neu5Ac-a-mercaptobenzothiazolyl ketoside could not be prepared by this procedure. It was completely hydrolysed during Zemplen saponification and methyl-ester hydrolysis in alkaline medium. Phasen-Tmnsfer-katalysierte Synthese von N-Acetylneuraminsäure a-thioketosiden und Inhibitor-Studien mit Clostridium-perfringens-SialidaseZusammenfassung: Die -Thioketoside des 4,7,8,9-Tetra-O-acetyl-TV-acetylneuraminsäure-methylesters mit Thioessigsäure, Thiophenol, 4-Nitrothiophenol, 4-Aminothiophenol, 2-Mercaptopyridin und Mercaptobenzothiazol als Aglycone wurden mittels PhasenTransferkatalyse in guten Ausbeuten darstellt. Der 2-Thioacetyl-4,7,8,9-tetra-O-acetyK/V-acetylneuraminsäure-methylester ist das Thio-Analogon des W-Acetyl-2,4,7,8,9-penta-0-acetylneuraminsäure-methylesters und kann als Zwischenverbindung zur Darstellung von S-Ketosiden der NeuSAc verwendet werden. Durch Zemplen-und milde Hydrolyse des Methylesters konnten die freien Neu5Ac--Thioketoside mit Thiophenol, 4-Nitro thiophenol, 4-Aminothiophenol und 2-Mercaptopyridin dargestellt werden. Sie wurden als Sialidase-Inhibitoren für C.-perfringens-Sialidase getestet. Es wurden K { -Werte von 6.6mM (Thiophenyl-Neu5Ac), 4.1mM (4-Aminothiophenyl-Neu5Ac), 2.5mM (2'-Mercaptopyridyl-NeuSAc) und 2.3mM (4-NitrothiophenylNeuSAc) ermittelt. Das freie Mercaptobenzothiazolyl-a-Neu5Ac-ketosid konnte nicht dargestellt werden, da unter den alkalischen Bedingungen der Zemplen-und Methylester-Hydrolyse eine vollstän-dige Ketosidspaltung erfolgte.

α‐N‐Ketosides of N‐acetylneuraminic acid (Neu5Ac) can be synthesized by using azide and thiocyanate salt as aglycone under conditions of phase‐transfer catalysis (PTC). The catalytic hydrogenation of the 2‐α‐azido ketoside 3 leads to the 2‐α‐amino ketoside 4 in good yield. This 2‐α‐amino ketoside 4 can be transformed into the 2‐α‐acetamido ketoside 5 and the 2‐α‐benzoylamido ketoside 6. Zemplén deacetylation and saponification give the corresponding 2‐N‐acyl ketosides 7 and 8, which cannot be hydrolyzed by neuraminidase (Clostridium perfringens). Treatment of the 2‐α‐amino ketoside 4 with p‐nitrobenzaldehyde results in the formation of p‐nitrobenzylideneamine 9. Based on the strict stereoselectivity of the PTC glycosidation reaction with sialic acid derivatives and the exclusive formation of the N‐ketoside 10 in the reaction with potassium thiocyanate, a model of the mechanism of the PTC glycosidation procedure with sialic acid derivatives has been evaluated.

2-a-(N-Dansyl-4-aminophenylthio)-./Vacetyl-9-O-acetylneuraminic acid (10) was prepared as a new specific and highly sensitively detectable sialate-9-O-acetyl-esterase substrate. It is built up from a sialidase-stable aminophenyl-a-thioketoside of Nacetylneuraminic acid. By labeling this thioketoside with dansyl chloride a fluorescent neuraminic acid derivative was prepared which allows determinations down to the picomol range. Regioselective acetylation with trimethylorthoacetate results in the corresponding 9-0-acetyl derivative. After incubation with esterase from bovine brain the hydrolysis products were separated on a HPLC column and fluorimetrically detected at 334 nm excitation and 564 nm emission.The K m value of 2.5mM was in the range between the values of the completely unspecific methylumbelliferyl acetate and the less sensitively detectable A r -acetyl-9-O-acetylneuraminic acid which have been used up to now as standard substrates.Zusammenfassung: 2-a-(7V-Dansyl-4-aminophenylthio)-./V-acetyl-9-O-acetylneuraminsäure (10) wurde als neues spezifisches Sialinsäure-9-O-acetylesteraseSubstrat synthetisiert, das noch bis in den PicomolBereich nachgewiesen werden kann. Als Ausgangsverbindung diente das a-Aminophenyl-thioglycosid des Peracetylneuraminsäure-benzylesters. Die Reaktion des Thioglycosids mit Dansylchlorid ergibt ein fluoreszierendes Neuraminsäureglycosid, das durch regioselektive Acetylierung mitTrimethylorthoacetat zum entsprechenden 9-O-acetylierten Neuraminsäure-Derivat umgesetzt wird. Nach Inkubation mit Esterase aus Rinderhirn konnten die Hydrolyseprodukte mittels HPLC getrennt und fluorimetrisch bei einer Anregungswellenlänge von 334 nm und einer Emissionswellenlänge von 564 nm delektiert werden. Der Ä: m -Wert beträgt 2.5mM und liegt zwischen dem des Methylumbelliferylacetats und dem der N-Acetyl-9-O-acetylneuraminsäure, die bislang als Standardsubstrate verwendet wurden.

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