Antimicrobial peptides are molecules of natural origin, produced by organisms such as insects, which have focused attention as potential antiparasitic agents. They can cause the death of parasites such Leishmania by interacting with their membrane. In this study, additional information was obtained on how the anionic peptide 2 and cecropin D-like peptide derived from Galleria mellonella interact with liposomes that mimic the composition of the Leishmania membrane. In order to do this, lipid bilayers consisting of dipalmitoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylethanolamine, dimyristoylphosphatidylserine, and dimyristoylphosphatidylglycerol were constructed. The effect of the peptides on these membranes was evaluated using calorimetry analysis and fluorescence spectroscopy. The results obtained using differential scanning calorimetry indicated a concentration-dependent effect on membranes composed of phosphatidylserine and phosphatidylglycerol, showing a preference of both peptides for anionic lipids. The binding of the peptides drastically reduced the transition enthalpy in the phosphatidylserine and phosphatidylglycerol liposomes. The results suggest that the mode of action of anionic peptide 2 and cecropin D-like peptide is different, with a higher effect of cecropin D-like on the anionic lipids, which led to changes in the main transition temperature and a complete solubilization of the vesicles. Interactions between peptides and phosphatidylcholine, which is the most abundant lipid on the surface of Leishmania cells, were evaluated using isothermal titration calorimetry and the anisotropy of fluorescence of DPH. The peptides had a slight effect on the gel phase of the phosphatidylcholine, with changes in the anisotropy correlated with that observed by DSC. The results showed a selectivity of these peptides toward some lipids, which will direct the study of the development of new drugs.
El reto inmunológico con promastigotes de Leishmania (Viannia) panamensis en Galleria mellonella modula cambios en los perfiles de expresión de proteínas de bajo peso molecularGalleria mellonella immunological challenge with Leishmania promastigotes triggers changes on the profile expression of low molecular weight proteins Los péptidos antimicrobianos (PAMs) son considerados agentes prometedores contra un amplio espectro de enfermedades infecciosas, siendo potenciales agentes terapéuticos con una baja toxicidad. Los PAMs son parte de la respuesta inmune de insectos, de donde han sido aislados, demostrando tener actividad antibacteriana y anti-fúngica. La polilla Galleria mellonella expresa un amplio repertorio de péptidos como respuesta al reto con diversos organismos, lo que sugiere una alternativa para la obtención de péptidos con actividad Patiño-Márquez et al. Actual Biol 39 (107): xxx-xxx, 2017 | DOI: 10.17533/udea.acbi.v39n107a02 2 Este artículo está protegido por derechos de autor. Todos los derechos reservados.antiparasitaria. Este estudio utilizó un reto inmunológico con promastigotes de Leishmania (Viannia) panamensis sobre larvas de Galleria mellonella para la búsqueda de fracciones peptídicas con actividad antiparasitaria. La hemolinfa fue obtenida de larvas control, inoculadas con PBS y retadas con parásitos. La hemolinfa libre de hemocitos de cada tratamiento fue analizada por electroforesis de dos dimensiones (gel 2D). Además, la hemolinfa fue fraccionada por RP-HPLC. El análisis del gel 2D identificó cuatro señales (manchas) en la hemolinfa retada y 3 señales en la hemolinfa con PBS. Estas señales no se encontraron en la hemolinfa control. Por otro lado, fracciones de RP-HPLC de la hemolinfa retada mostraron más actividad leishmanicida en comparación con las mismas fracciones de la hemolinfa control. Esta aproximación puede proveer nuevos péptidos contra Leishmania.Palabras claves: Hemolinfa, electroforesis 2D, G. mellonella, Leishmania, PAMs, Perfiles proteicos AbstractThe Leishmania parasite is responsible for several diseases that affect humans and animals in more than 95 countries including Colombia. Despite the known toxicity shown by current drugs such as Glucantime or Amphotericin B, they are still used as treatments against the parasite. Natural antimicrobial peptides (AMPs) are considered promising agents for use against a broad spectrum of infectious diseases, they are considered promising and non-toxic therapeutic agents. AMPs are part of the immune response of organisms such as insects, from where they have been isolated and shown to have antibacterial and antifungal activity.Galleria mellonella moths express a broad repertoire of peptides in response to challenges
Antecedentes y objetivos: La endonucleasa G (EndoG) es una enzima que escinde específicamente en las posiciones dG y dC del ADN de cadena doble y se ha demostrado que participa en la degradación de la cromatina durante el proceso de apoptosis en Leishmania. El objetivo principal de este trabajo fue la purificación y cristalización de EndoG como preámbulo para los estudios estructurales futuros que permitan entender detalladamente el funcionamiento de esta enzima. Materiales y métodos: La proteína EndoG fue purificada en condiciones desnaturalizantes usando cromatografía de Ni, luego fue renaturalizada in vitro y cristalizada por el método de difusión de vapor por gota colgante. Resultados y conclusión: La proteína EndoG de Leishmania (viannia) panamensis fue sobreexpresada, renaturalizada, purificada y demostró estar enzimáticamente activa. Aquí, se registra la primera cristalización exitosa de la proteína EndoG de este grupo de parásitos protozoarios. La proteína fue cristalizada por el método de difusión de vapor por gota colgante. Se obtuvieron cristales de alta calidad de EndoG que posiblemente nos permitirán determinar la estructura tridimensional de EndoG usando difracción de rayos-X.
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