Aqueous solutions of cholesterol and some cholesteryl esters were prepared. The hydrolysis of cholesteryl esters with enzymatic methods could therefore be studied in some detail.The total cholesterol concentration of the aqueous cholesterol and cholesteryl ester solutions was determined by 6 different enzymatic procedures as well as the Liebermann-Burchard method.For some esters (acetate and arachidonate esters) the esterase reaction is not complete within the usual reaction time, whereas most other esters gave analytical results lower than the theoretical. With the Liebermann-Burchard method all esters reacted completely within the reaction time.The esterases have very different specificities for the various cholesteiyl esters.With the enzymatic method several commercial control sera as well as human sera gave lower cholesterol concentrations than the Liebermann-Burchard method. These differences can be explained mainly by this incomplete hydrolysis.Some practical recommendations are given. Unvollständige Hydrolyse von Cholesterinestern bei der enzymätischen Cholesterinbestimmung in wäßrigen Lösungen von Cholesterinestern: Vergleich von sechs enzymätischen Verfahren mit der Liebermann-Burchard-MethodeZusammenfassung: Wäßrige Lösungen von Cholesterin und einigen Cholesterinestern wurden hergestellt; daran konnte die Hydrolyse von Cholesterinestern mit enzymätischen Methoden in einigen Einzelheiten untersucht werden.Die Cholesterin-Gesamtkonzentration der wäßrigen Cholesterin-und Cholesterinester-Lösungen wurde mit sechs verschiedenen enzymätischen Verfahren sowie mit der Liebermann-Burchard-Meihode bestimmt.Für einige Ester (Acetat-, Arachidonat-) ist die Esterasereaktion innerhalb der üblichen Reaktionszeit nicht vollständig, während die meisten anderen Ester niedrigere Analysenresultate als theoretisch erwartet ergaben. Mit der LiebermannBurchardMeüaode reagieren die Ester innerhalb der Reaktionszeit vollständig. Die Esterasen haben sehr unterschiedliche Spezifitäten für die verschiedenen Cholesterinester.Mit der enzymätischen Methode ergaben mehrere käufliche Kontrollseren als auch Serum vom Menschen niedrigere Cholesterinkonzentrationen als die Liebermann-Burchard-Methode. Diese Differenzen können im wesentlichen durch unvollständige Hydrolyse erklärt werden.Einige praktische Hinweise werden gegeben.

The determination of serum albumin with the dye reagent bromocresol purple was investigated.We found that bromocresol purple is not a specific reagent for albumin, but that serum proteins in the a-, 0-, and 7-globulin fractions also react with this dye. Similar results were obtained for bromocresol green.Furthermore there is a great difference in absorbance between human and bovine albumin solutions (having the same concentration) when using the bromocresol purple reagent. Most probably this is a result of the difference in interaction of the reagent with the substrate.Although the standard curves with the bromocresol purple method were more linear (especially at higher albumin concentrations) than those obtained with the bromocresol green method, we still prefer the bromocresol green technique to the bromooresol purple technique, because its results are more comparable with those of other methods.Moreover in quality control and calibration procedures, strong deviations from the recommended values are obtained when non-human sera are analyzed with the bromocresol purple method.For reasons of accuracy more specific methods are preferable. Bromkresolpurpur, ein nicht-spezifisches Farbreagenz zur Bestimmung von Serum-AlbuminZusammenfassung: Die Bestimmung von Serum-Albumin mit dem Farbreagenz Bromkresolpurpur wurde untersucht. Wir fanden, daß Bronftresolpurpur kein spezifisches Reagenz für Albumin ist und Serumproteine in der a-, ß-und -Globulinfraktion auch mit diesem Farbstoff reagieren. Ähnliche Ergebnisse wurden mit Bromkresolgrün erhalten. Es besteht ferner ein großer Unterschied in der Absorption von Albumin des Menschen und des Rindes gleicher Konzentration, wenn BromkresolpurpUr als Reagenz benutzt wird. Sehr wahrscheinlich beruht dies auf unterschiedlichen Wechselwirkungen des Reagenz mit dem Protein.Obwohl die Standardkurven mit der Bromkresolpurpur-Methode -besonders bei höheren Albuminkonzentrationen -geradliniger sind als die mit der Bromkresolgrün^Methode, ziehen wir unter Berücksichtigung des Vergleichs der Ergebnisse mit denen anderer Methoden doch die Bromkresolgrün-Methode der Bromkresolpurpur-Methode vor.Darüberhinaus werden bei Verwendung von Seren, die nicht vom Menschen stammen, in Qualitätskontroll-und Standardisieningsverfahren mit der Bromkresolpurpur-Methode starke Abweichungen von den angegebenen Werten erhalten.Hinsichtlich der Genauigkeit sind spezifischere Methoden vorzuziehen.

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