des Bereiches Medizin der Friedrich-Schi!!er-liniversität Jena Neue Varianten einer im Wissenschaftsbereich Glaschemie der Sektion Chernie der Friedrich-Schiller-UniVersität Jena entwickelten maschinell bearbeitbaren Glaskeramik sind für die rekonstruktive Mittelohrchirurgie wegen der guten Bearbeitbarkeit, der steuerbaren ,,Bioaktivität" und der geringen Losungserscheinung besonders geeignet. Diese Materialien, die aus einer Glas-und einer Glimmerphase bestehen, könnenähnlich Metallengebohrt, gedreht und gefrast werden. Die Glirnmerkristalle von Phiogopittyp sind in der 0,01-Ebene leicht spaitbar und gewahrleisten bei geeigneter Anordnung und Gro1enverteilung diese besonderen rnechanischen Eigenschaften (4).
Zur Testung biologischer Reaktionen auf diesen neuenMaterialien haben wir u. a. die Ausbreitung und Adhäsion von Epitheloidzellen und Fibroblasten im Rasterelektronenmikroskop (REM) beobachtet und mit dern Zeilverhalten auf Glaskohienstoff sowie Menzelglas als inerte Referenzmaterialien verglichen. Auf.erdem haben wir die Keramiken in Kaninchenmittelohren implantiert, urn das Verhalten der Epithelschicht in vivo studieren zu können. Als Vergleichsmaterial diente bier ebenfalls der als hochinert angesehene Glaskohienstoff (3, 8). Material und Methode Testmaterial: Wir untersuchten Proben von verschiedenen Biovitrokeramiken, die uns von dem o. g. Institut zur Verfugung gestellt wurden. Dabei handelt es sich urn phlogopithaltige Glaskeramik des Si02-A1203-MgO-Na,O-K20-F-Systems mit und ohne GaO und P205. Für die Zelikultur standen irregulare Materialproben mit einer Gröf?e von 5-10 mm in ihrem weitesten Durchmesser zur Verfugung. Sie waren an ibrer Oberfllche plangesSgt. Die Proben wurden in destilliertem Was-ser gewaschen, anschlie1end mit Ather/Athanol gereinigt. Die Sterilisation erfolgte bei 200° für 2 Stunden. Als Vergleichsmaterial diente in gleicher Weise vorbehandelter inerter Glaskohlenstoff aus dem VEB Elektrokohle Berlin-Lichtenberg° und Deckgläschen aus Menzelglas. Für die Ohrimplantation verwandten wir zylinderformige und quaderformige Körper aus der ph]ogopithaltigen Biovitrokeramik und aus Glaskoblenstoff mit einem Durchmesser von 2 mm und einer maximalen Lange von 4 mm. Zellkultur: Wir arbeiteten mit Epitheloidzellen der Zellinie RL 19 aus neonataler Rattenleber. Die Zellen wurden in Glasflaschen mit Eagle-Minimal-Medium (Staatliches Institut für Immunpräparate und Nährmedien, Berlin) gehalten und mit 10 %igem Kälberserum sowie 100 IE Penicillin pro ml und 0,1 mg Streptomycin pro ml versetzt. Auerdem verwandten wir embryonale Rattenfibroblasten, die in Glasflaschen mit Eagles-Basal-Medium, 10 %igem Kälberserum, 2 %igem fötalem KIlberserum und der oben angegebenen Antibiotikadosierung kultiviert wurden. REM-PrSparation: Die auf Glaskeramik, Glaskohienstoff und den Deckglaschen gewachsenen Monolayerzellen wurden für die Rasterelektronenmikroskopie mit 2,5 % Glutaraldehyd in Hanks'-Losung 30 mm bei Raumtemperatur fixiert. Anschliegend wurden die Proben 4maI in filtrierter Hanks'-Ldsung gespült und ...
In this study we investigated primary cultures obtained from two glioblastomas surgically removed from a 64-year-old man and a 50-year-old woman, respectively. The presence of the tethered ligand thrombin receptor PAR1 (protease-activated receptor 1) in these cells was demonstrated at the level of receptor binding by using immunofluorescence studies with the monoclonal anti-PAR1 antibody Mab 31-2. Stimulation of human glioblastoma cells both with alpha-thrombin and the thrombin receptor activating peptide TRAP-6 resulted in a series of [Ca+]i spikes as shown by confocal laser fluorescence microscopy with fluo-3 as calcium sensitive fluorescence indicator. This effect was completely blocked with the thrombin receptor antagonist peptide T1. Our results demonstrate functional thrombin receptors (PAR1) in primary cultures of human glioblastomas for the first time.
Thrombin is known to play a role as regulator in tumor spreading and tumor growth. Proteinase-activated receptor 1 (PAR 1)-type thrombin receptors were identified in different cancer cells including human glioblastoma cells. Thus a function of PAR 1 in brain tumors may be suggested. In this study, the presence of PAR 1-type thrombin receptors was investigated in primary cell cultures established from operated human meningiomas from two 59- and 79-year-old women. Characterization of PAR 1 on binding level was performed using immunofluorescence studies with the monoclonal anti-PAR 1 antibody Mab 61-1 directed against a domain in the NH2-terminus of PAR 1. These binding sites constitute functional thrombin receptors that are involved in thrombin-induced signaling in human meningioma cells as demonstrated by investigation of alpha-thrombin- and PAR 1-activating hexapeptide (TRAP-6)-induced [Ca2+]i mobilization. To our knowledge, this is the first report demonstrating thrombin-induced intracellular signaling in human meningioma cells mediated by the PAR 1-type thrombin receptor.
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