The ability of some microorganisms to survive a stress treatment such as freeze drying has been shown to improve when aging the cells is done before drying. Hutton and Shirey (1951) described the beneficial effects of adding filtrates from aged cultures to cell paste of Brucella abortus before freeze drying. Record and Taylor (1953) showed that an exudate of Escherichia coli offered protection to Escherichia coli and to other organisms as well. These investigators have suggested that this biological activity is due to a substance from bacteria and that it is effective in relatively small concentrations. We have studied the action of this viability protective factor (VPF) and have separated it from other constituents of the bacterial exudate. Also it has been partially characterized. The work reported here concerns the extraction of VPF from Brucella abortus and the measurement of its activity upon the survival of this organism during freeze drying. MATERIALS AND METHODS The culture employed was Brucella abortus BAI strain A-19 grown in a tryptose-cerelose broth at 32 C. This medium had the following composition in g/L: tryptose (Difco), 20.0; cerelose, 10.0; NaCl, 5.0; and 10 ml of a Seitz filtered solution containing 25 mg of thiamin hydrochloride (per L) which was added aseptically after the other ingredients had been autoclaved. Two per cent agar was added when a solid medium was desired. In order to obtain cell paste for the production 1 The major portion of this investigation was conducted as part of the work performed under Research and Development contract no. DA-18-064-CML-2410 for Camp Detrick,
Seit Kunit z 1 über die Kristallisation der pankreatischen Desoxyribonuclease** berichtete, wurden zahlreiche ähnliche Enzyme zumeist aus tierischen Geweben isoliert 2 . Cunningham und Mitarbeiter 3 konnten aus Nährmedien von Micrococcus pyogenes eine teilweise Anreicherung einer DNA-ase erzielen, welche für ihre Wirksamkeit im Gegensatz zu früher gefundenen Enzymen Ca-Ionen benötigte. DNA-asen können nach ihren optimalen pn-Aktivitäten und ihrem Bedarf an bestimmten Ionen in zwei Gruppen geteilt werden : DNA-ase I bedarf Magnesiums oder anderer zweiwertiger Kationen und eines neutralen ^H -Wertes, während DNA-ase II durch Magnesium gehemmt wird und nur in sauren Medien aktiv ist 2 .Smithies und Gibbons* sowie Halleck und Szafran 5 » 6 zeigten, daß der viskose Schleim, der von verschiedenen halophilen Bakterienkulturen produziert wird, hauptsächlich aus DNA und Proteinen besteht. Takahashi und Gibbons 7 konnten mit Hilfe radioaktiven Phosphors beweisen, daß die extrazellulare DNA intrazellularen Ursprungs war. C atiin 8 bekräftigte diese Befunde durch die Tatsache, daß die extrazellulare DNA stark genetisch aktiv war. Wir konnten diesen Schleim durch wiederholtes Umfallen mit Äthanol weitgehend reinigen und erhielten hochpolymere DNA. Die DNA wurde aber nicht immer in hochpolymerem Zustand erhalten, wie aus der erhöhten Extinktion der isolierten Produkte hervorging. Dies wies auf das Vorhandensein einer DNA-ase hin.Pseudomonas aeruginosa NRRLB1726*** wurde in 2proz. Trypticase -Nähr-brühe unter Schütteln bei 30° kultiviert. Nach 48 Stdn. wurden die Zellen zentrifugiert, danach in 5proz. Kochsalzlösung aufgeschlämmt und weitere 24 Stdn. bei 30° inkubiert, worauf die Zellen abermals durch Zentrifugieren abgetrennt wurden. Die Zellpaste wurde in einem eingeschliffenen Bellco Gell Grinder mehrmals zerrieben, wobei jedesmal mit physiologischer Kochsalzlösung extrahiert wurde. Die drei Flüssigkeiten (Kulturmedium, Kochsalzlösung, Zellextrakt) wurden einzeln mit Ammoniumsulfat bei p^l gefällt 9 . Die verschiedenen Niederschläge wurden in
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.
hi@scite.ai
10624 S. Eastern Ave., Ste. A-614
Henderson, NV 89052, USA
Copyright © 2024 scite LLC. All rights reserved.
Made with 💙 for researchers
Part of the Research Solutions Family.