Aminopyrazole derivatives constitute the first class of nonpeptidic rationally designed beta-sheet ligands. Here we describe a double solid-phase protocol for both synthesis and affinity testing. The presented solid-phase synthesis of four types of hybrid compounds relies on the Fmoc strategy and circumvents subsequent HPLC purification by precipitating the final product from organic solution in pure form. Hexa- and octapeptide pendants with internal di- and tetrapeptide bridges are now amenable in high yields to combinatorial synthesis of compound libraries for high-throughput screening purposes. Solid-phase peptide synthesis (SPPS) on an acid-resistant PAM allows us, after PMB deprotection, to subject the free aminopyrazole binding sites in an immobilized state to on-bead assays with fluorescence-labeled peptides. From the fluorescence emission intensity decrease, individual binding constants can be calculated via reference curves by simple application of the law of mass action. Gratifyingly, host/guest complexation can be monitored quantitatively even for those ligands, which are almost insoluble in water.
—O3S—p‐C6H4—N2+ wurde bei —50 °C mit Natriumazid in Methanol umgesetzt. Dabei entstand das 4‐Pentazolylbenzolsulfonat [O3S—C6H4—N5]— neben 4‐Azidobenzolsulfonat (Stoffmengenverhältnis in der Lösung 27:73 nach NMR). Nach Zusatz von KOH in Methanol fiel bei —50 °C das Gemisch der Kaliumsalze K[O3S—p‐C6H4—N5] + K[O3S—p‐C6H4—N3] im Verhältnis 60:40 aus. Aus einer Lösung dieses Gemisches und 18‐Krone‐6 in Tetrahydrofuran wurde nach Zusatz von Petrolether bei —70 °C das kristalline Pentazol‐Derivat [THF‐K‐18‐Krone‐6] [O3S—p‐C6H4—N5]·THF erhalten. Aus derselben Lösung wurde nach Eindampfen und Wiederauflösen in THF/Petrolether bei —30 °C das kristalline Azid [THF‐K‐18‐Krone‐6][O3S—p‐C6H4—N3]·THF erhalten. Aus einer Lösung von letzterem in Chloroform/Toluol entstand an Luft [K‐18‐Krone‐6][O3S—p‐C6H4—N3]·1/3H2O. Nach den Röntgenstrukturanalysen haben [THF‐K‐18‐Krone‐6][O3S—p‐C6H4—N5]·THF und [THF‐K‐18‐Krone‐6][O3S—p‐C6H4—N3]·THF die gleiche Kristallpackung. Nennenswerte Unterschiede gibt es nur bei den Atomlagen des Pentazolrings im Vergleich zur Azidogruppe und bei einem THF‐Molekül, das an das Kaliumion koordiniert ist; mit den verschiedenen Orientierungen des THF‐Moleküls wird der verschiedene Platzbedarf von N5 bzw. N3 ausgeglichen. In [K‐18‐Krone‐6][O3S—p‐C6H4—N3]·1/3H2O ist neben einer Baugruppe aus einem [K‐18‐Krone‐6]+‐Ion mit einem [O3S‐C6H4—N3]—‐Ion eine Baugruppe vorhanden, in der zwei [O3S‐C6H4—N3]—‐Ionen über zwei [K‐18‐Krone‐6]+‐Ionen und ein Wassermolekül zusammengehalten werden. Die Geschwindigkeitskonstanten für den Zerfall [O3S‐C6H4—N5]— → [O3S‐C6H4—N3]— + N2 in Methanol wurden bei 0 °C und —20 °C bestimmt.
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