Actinobacilluspleuropneumoniae is the causative agent of swine pleuropneumonia, a contagious respiratory disease associated with high morbidity and economic losses. While antibiotic therapy helps to control the spreading of the pathogen on the farm, resistance to several classes of antibiotics were reported, and treatment can be impaired by the bacterial ability to form biofilms. This increases the need for alternative therapy approaches, including the use of natural compounds with antimicrobial and/or antibiofilm activities. In this research we analyzed, by the broth microdilution method, the inhibitory and bactericidal activities of the essential oils obtained from eighteen Brazilian popular medicinal plants or spices against clinical isolates of Actinobacilluspleuropneumoniae. After that, sub-inhibitory concentrations of active oils were tested for their antibiofilm effects, analyzed by the crystal violet method. Among the eighteen oils tested, eight (extracted from cinnamon, coriander, peppermint, spearmint, thyme, marjoram, eucalyptus, and laurel) presented bacteriostatic and bactericidal activities against all isolates, and subinhibitory concentrations of five of them disrupted up to 80% preformed biofilms, and significantly inhibited biofilm formation. The chemical composition of such oils was assessed by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) and is presented, indicating that their bactericidal and antibiofilm properties were mostly associated with the presence of monoterpenes and phenylpropanoids. To our knowledge, this is the first report of essential oils with potential to control environmental contamination and animal infection with A. pleuropneumoniae, representing an alternative to increasing levels of antibiotic resistance.
A utilização de antibióticos de maneira indiscriminada está diretamente relacionada com a seleção de bactérias resistentes. Como alternativa no combate a infecções bacterianas, tem-se prospectado novas moléculas provenientes de produtos naturais, como aquelas presentes nos óleos essenciais. Estes são compostos do metabolismo secundário de plantas, com algumas funções antibacterianas confirmadas. Adicionalmente, desempenham funções na atração de polinizadores, alelopatia e proteção contra mudanças drásticas na temperatura. O presente estudo analisou o efeito antibacteriano de óleos essenciais em Meticilina-resistente Staphylococcus aureus USA300 (MRSA-USA300). Esta bactéria é responsável por diversos casos de infecções na pele, no pulmão e podendo causar sepse. Estudos anteriores relataram a multirresistência desta bactéria a diversas classes de antibióticos, elevando a importância na prospecção de novas moléculas para o combate deste microrganismo. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana e antibiofilme de dezenove óleos essenciais e de suas formulações tópicas em MRSA-USA300. Inicialmente, dezenove óleos essenciais foram analisados quanto a possível atividade antibacteriana e antibiofilme em MRSA-USA300. Quatro óleos essenciais apresentaram atividade antibacteriana na triagem inicial, sendo eles: canela, coentro, cravo e tangerina. Os resultados de cromatografia gasosa desses óleos revelou os principais componentes, sendo predominantes os terpenos e fenilpropanoides. As análises de concentração inibitória mínima (CIM) e de concentração bactericida mínima (CBM) foram realizadas com os quatro óleos essenciais ativos. Os valores de CIM e CBM foram idênticos para todos os óleos essenciais, com valores entre 10 mg/mL a 1,25 mg/mL. O óleo essencial de coentro (1,25 mg/mL) e o de canela (2,5 mg/mL) apresentaram os menores valores de CIM e CBM sendo considerados os mais efetivos. Adicionalmente, foram realizadas análises de citotoxicidade em eritrócitos humanos. O óleo essencial de tangerina foi o único que causou hemólise em todas as concentrações analisadas. Os demais óleos essenciais não causaram hemólise na concentração de 1xCIM e nas sub-CIM. Nas análises do biofilme pré-formado, todos os óleos analisados foram capazes de romper o biofilme nas concentrações CIM e supra-CIM, sendo o óleo de coentro o único capaz de romper em uma concentração sub-CIM (1/2x). Para o biofilme em formação, o óleo essencial de canela apresentou uma maior inibição na concentração 1/2xCIM. Os óleos de canela e coentro foram selecionados para serem incorporados em formulações tópicas na consistência de gel. A CIM e a CBM das formulações contendo os óleos foram idênticas comparadas quando se utilizou os óleos isolados. Ademais, os experimentos de hemólise, biofilme pré-formado e biofilme em formação apresentaram resultados semelhantes quando as formulações tópicas foram analisadas, evidenciando a capacidade das formulações no rompimento e inibição do biofilme e a não toxicidade em eritrócitos humanos. As formulações contendo óleos essenciais de canela e coentro apresentaram características bactericidas a partir da análise da curva de crescimento, sendo a que continha o óleo essencial de coentro apresentando uma maior taxa de morte. Nas análises in vivo com Galleria mellonella, as formulações foram consideradas seguras por não acarretar a morte dos indivíduos na concentração CIM. Esses resultados evidenciam a possibilidade do uso dos óleos essenciais analisados e suas formulações tópicas como agentes no tratamento a infecções causadas por bactérias resistentes, a exemplo do MRSA-USA300. Palavras-chave: Antibióticos. Óleos essenciais. Formulações tópicas. Multirresistência.
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