Gen proinsulin telah berhasil diinsersi pada galur Pichia pastoris X33, GS115 dan KM71H pada penelitian sebelumnya, namun masih memerlukan optimasi. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui ekspresi galur P. pastoris dan waktu induksi yang optimal dalam mengekspresikan proinsulin. Ekspresi proinsulin dilakukan pada suhu 20 °C selama 120 jam untuk pemilihan galur terbaik. Variasi lama induksi yang digunakan adalah 0, 24, 48, 72, 96, 120 dan 144 jam untuk mengetahui waktu induksi optimal. Kultur kemudian dilisis, dielektroforesis menggunakan Tricine SDS PAGE dan divisualisasikan dengan pewarnaan perak. Berdasarkan ketebalan pita yang terbentuk pada gel elektroforesis, galur X33-X2 menghasilkan proinsulin terbanyak dibandingkan GS115-G11 dan KM71H-K4.. Ekspresi proinsulin optimal pada 120 jam dan mengalami penurunan proinsulin pada waktu induksi 144 jam akibat akumulasi metanol. Galur X33-X2 merupakan inang terbaik dan waktu induksi 120 jam merupakan waktu induksi optimal dalam mengekspresikan proinsulin secara intraseluler. Hasil ini diharapkan dapat menjadi referensi dalam mengembangkan produksi insulin di Indonesia.
Diabetes is a metabolic disorder characterized by hyperglycemia. There were 215 million diabetic patients in 2014 and the number is expected to rise in 2040. Generally, insulin is used to treat diabetic patients. Insulin production by recombinant technology has been done, though still inefficient, by using E. coli and S. cerevisiae expression system. Another alternative expression system is methylotrophic yeast Pichia pastoris. In this research, proinsulin has been expressed by P. pastoris intracellularly. P. pastoris strains used in this research were X33, GS115, and KM71H. All recombinant strains were Mut S . Best cultivation media was BMGY. Proinsulin expression was observed at 25°C. Pichia pastoris strain that expressed proinsulin best was GS115-PI. It was supported by PCR in which the strain GS115-PI gave 504 bp-sized bands. Based on proinsulin formation time, the final methanol concentration of 0.5% in 72 hours was found to be the best treatment. ABSTRAKDiabetes melitus merupakan kelainan yang ditandai dengan hiperglikemia. Penderita diabetes pada tahun 2014 di dunia mencapai 215 juta dan diperkirakan akan meningkat pada tahun 2040. Umumnya penderita diabetes diberi pengobatan insulin sehingga menunjukkan akan ada peningkatan kebutuhan insulin. Produksi insulin dengan teknologi DNA rekombinan telah dilakukan dengan menggunakan sistem ekspresi E. coli dan S. cerevisiae namun masih belum efisien. Sistem alternatif lain adalah ragi metilotropik Pichia pastoris. Dalam penelitian ini dilakukan ekspresi proinsulin dari P. pastoris secara intraseluler. Galur P. pastoris yang digunakan dalam penelitian ini adalah X33, GS115, dan KM71H. Semua galur rekombinan adalah Mut S . Media tumbuh terbaik adalah BMGY. Ekspresi proinsulin terlihat pada suhu 25°C. Hasil PCR menunjukkan bahwa galur GS115-PI yang dapat menghasilkan pita amplikon berukuran 504 bp. Hasil PCR ini dibuktikan oleh hasil seleksi galur yang menunjukkan bahwa galur GS115-PI dapat mengekspresi proinsulin dibandingkan galur lainnya. Berdasarkan kecepatan pembentukan pita protein proinsulin, variasi konsentrasi akhir metanol 0,5% dengan lama induksi 72 jam merupakan perlakuan terbaik.
The quality of chocolate influenced by cocoa varieties, growth conditions, and fermentation. As a part of post-harvesting treatments, cocoa beans fermentation affects biochemical transformations resulting in the aroma, color, and taste of chocolate. Lactic acid bacteria (LAB) and acetic acid bacteria (AAB) along with yeasts are involved during during cocoa beans fermentation. In this study, the diversity of LAB and AAB of cocoa beans fermentation from Lampung will be identified. Fortykgs of cocoa beans undergo spontaneous box fermentation for five days, with 24 hours intervals of sampling. DeManRogosa Sharpe (MRS) Agar and Glucose Yeast Peptone (GYP) Agarwere used for LAB and AAB enumeration, respectively. Morphology of each colony were identified and molecular identification by analyzing 16S rRNA gene. As results, the growth of LAB reach its highest level on the zero and fifth day of fermentation to 106 CFU/mL and the growth of AAB reach 106 CFU/mL as well.Lactobacillus plantarum, L. fermentum and L. pentosusare the main species of lactic acid bacteria, and Acetobacterpasteurianusand A. tropicalisas the main species of acetic acid bacteria. These results describe more about the diversity of Indonesian cocoa that could be applied for starter culture development.
Potato is a food commodity that has the potential to support food diversification in Indonesia. There is an increasing demand for Atlantic potatoes as the raw material for processed potato products. The demand, which has not been met by the increased production, has been the cause of the ongoing potato import activities in Indonesia. The limitation of producing quality Atlantic potato seeds economically is one of the obstacles to increasing the production of Atlantic potatoes in Indonesia. The aim of this research was to study the effect of various table sugar concentrations as the carbon source and the type of the culture containers used for Atlantic potato shoot multiplication in vitro. The propagation was carried out in bioreactors and culture bottles with MS liquid medium + coconut water at a concentration of 150 mL/L medium, and 3 concentration levels of table sugar, namely 0; 7.5; and 15 g/L medium. The use of bioreactor significantly increased the height of the Atlantic potato plantlets. The use of bioreactor combined with table sugar addition decreased hyperhydricity level. The highest number of shoots, leaves, and roots were found at the table sugar concentration of 15 g/L medium in both containers. ABSTRAKKentang merupakan komoditas pangan yang berpotensi mendukung program diversifikasi pangan di Indonesia. Peningkatan permintaan terhadap kentang Atlantik sebagai bahan baku kentang olahan yang tak diimbangi dengan peningkatan produksi kentang Atlantik menjadi penyebab masih berlangsungnya impor kentang Atlantik di Indonesia. Keterbatasan menghasilkan benih kentang Atlantik berkualitas yang ekonomis merupakan salah satu hambatan dalam meningkatkan produksi kentang Atlantik di Indonesia. Penelitian ini bertujuan mempelajari pengaruh variasi konsentrasi sukrosa teknis sebagai sumber karbon dan penggunaan jenis wadah terhadap perbanyakkan tunas kentang Atlantik secara in vitro. Perbanyakkan tunas kentang Atlantik menggunakan media MS cair + 150 mL/L air kelapa dalam wadah bioreaktor dan botol kultur dengan 3 taraf konsentrasi sukrosa, yaitu 0; 7,5; dan 15 g/L media. Penggunaan bioreaktor secara signifikan meningkatkan tinggi planlet kentang Atlantik yang dihasilkan. Penggunaan bioreaktor yang dikombinasikan dengan penambahan sukrosa teknis menurunkan tingkat hiperhidrisitas. Tunas, daun, dan akar terbanyak dihasilkan oleh perlakuan sukrosa teknis 15 g/L media dalam kedua jenis wadah.
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.
hi@scite.ai
10624 S. Eastern Ave., Ste. A-614
Henderson, NV 89052, USA
Copyright © 2024 scite LLC. All rights reserved.
Made with 💙 for researchers
Part of the Research Solutions Family.