RESUMENSe ha purificado una miotoxina del veneno de la serpiente BOl/1ropS brazifi, empleando un solo pas cromatográfico de intercambio jónico sobre CM-Sephadex C-50 con buffer acetato de amonio 0,05 M pH 7. La pureza de la proteina fue evaluada por PAGE con y sin SOS , inm unodifusión inmunoeleclroforesis . La proteína es de naturaleza basica y contiene 15,6% de Lys+Arg ; además, n esta glicosilada , carece de actividad enzimatica , y por el método de Lowry se ha calculado que ell cons tituye el 25% de la proteína tolal del veneno .Por PAG E-SOS y cromatografía de fi ltración, se ha determinado que la miotoxina tiene un pes molecula r de 30 KOa , y está formada por 2 cadenas polipeplidicas de 15 KOa cada una.La inocu lación de la miotoxina en el músculo gastrocnemi us de ratones albinos , produce una seve ra necrosis del tejido .La miotoxina no tiene actividad hemol itica ni anticoagu la nte; sin em bargo , si produce edema , se h calculado una OEM de 32,6 ¡.¡g de proteína .Palabras clave : miotoxina, BOlhrops brazifi, veneno de serpiente, mionecrosis ABSTRACT A myotoxin from the venom of the snake Bothrops brazifi has been purified by io n-excha ng chro matography on CM-Sephadex C-50 with 0,05 M ammo nium acelate buffer pH 7. The homogene il was evaluated by PAGE wilh and withoul SOS, immunodi ffusion and immunoeleclrophoresis. Th myotoxin is a basic protein with 15,6% of Lys+Arg; il is not a glicoprotein , has not enzymatic activity, an corresponds to 25% of the whole venom protein.The molecularweight ofthe myotoxin was determined by PAGE-SOS and gel filtraUon chromatography The myotoxin has 30 KDa of molecular weight and two polypeptide chains of 15 KOa each .Myotoxin produces a severe necrosis on the gastrocnemius muscle of white mice.Th e myotoxin does not have hemolytic nor anticoagulant activity. However, produces edema with OEM of 32,6 [.1g of protein .
ResumenSe ha estudiado el modo de acción de la miotoxina aislada del veneno de la serpiente Bothrops brazili. La inoculación de la miotoxina en el músculo gastrocnemius de ratones albinos produce durante la primera hora de acción la liberación de creatina kinasa y lactato deshidrogenasa, mientras que por PAGE-SDS, se revela que la incubación de la miotoxina con músculo gastrocnemius aislado, produce además la liberación de otras proteínas musculares.Asimismo, la miotoxina produce hipercontracción, lesiones delta e incrementa los niveles de calcio intramuscular, tanto in vivo como in vitro, lo cual no depende del ingreso de calcio extracelular vía receptores de dihidropiridina. Este incremento de calcio explicaría la hipercontracción observada y podría generar la activación de proteasas y lipasas endógenas dependientes de calcio, que conducirían a la necrosis muscular. Palabras clave: miotoxina, Bothrops brazili, veneno de serpiente, mionecrosis AbstractThe myotoxin isolated from the venom of the snake Bothrops brazili has been studied in its mode of action. In the first hour of activity the myotoxin injected in the gastrocnemius muscle of white mice, induces the release of creatine kinase and lactate dehydrogenase, while by PAGE-SDS, it is shown that the incubation of miotoxin with isolated gastrocnemius muscle releases other proteins from this tissue.Moreover myotoxin produces hipercontraction, delta lesions and increases the concentration of intramuscular calcium "in vivo" and "in vitro", which does not depend on extracellular calcium entry through dyhidropyridine receptors. This increase of calcium would explain the hipercontraction observed. Also it could trigger the activation of endogenous proteases and lipases, which would lead to muscle necrosis. Keywords IntroducciónEn nuestro país la mayoría de serpientes venenosas pertenecen a la Familia Viperidae, siendo el género Bothrops, el más abundante y el responsable de la mayoría de accidentes ofídicos. Los venenos de estas serpientes producen, entre otros efectos, una severa necrosis del tejido muscular (mionecrosis) (Rosenfeld, 1971). En el caso de la familia Elapidae, sólo el veneno del grupo de las cobras produce también mionecrosis pero ésta es menos intensa que la ocasionada por los vipéridos.Por mucho tiempo se creyó que la necrosis producida por algunos venenos de serpientes se debía a la acción de enzimas proteolíticas presentes en el veneno (Houssay, 1930;Kellaway, 1939;Zeller, 1948;Porges, 1953;Kaiser and Michl, 1958). Sin embargo, una observación contraria a esta creencia fue establecida cuando se encontró que los venenos de cobras de la península malaya eran capaces de producir necrosis, pese a no ser Rev. peru. biol. 9(2): 74 -83 (2002)
Variaciones en la composición proteica, actividades enzim áticas y bio lógicas del veneno de la serpiente B othrops atrox (viperidae) en rela ci ón con la edadVariations in the protein composition, enzymatic and biological activities in the venom of Bothrops atrox snake (viperidae) in relation to age O. Málaga, C. Pantigoso, Y. Morante, V. Hercdia, J. Cárdenas, y A. Yarleq ué* RESUMENLa serpiente Bothrops atrox, que habita en la Selva Ama.cónica del Perú, es responsable del mayor número de accidentes ofídicos y constituye un problema de salud pública. Por esta razón, se ha realizado un estudio de las variaciones en la composición y actividad del venen o en Ires grupos de especímenes en cautiverio, que correspon den a juveniles de 1 y 2 años , así como ejemplares adultos mayores de 5 años. Los venenos obteni dos fu eron liofilizados para su conservación y diluidos en concentraciones iniciales de 1 mg/ml en solución salina o en el buffer apropiado.Con estas muestras se efectuaron los análisis de concentración de proteína por D. O 280 nm y por el método de Lowry, determinándose además el número de bandas proteicas por electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (PAGE-SDS). Con las mismas muestras se hicieron ensayos para medir las siguientes actividades enzimáticas : caseínolitica, amidolítica, coagulant e, hialuronidasa, L-aminoácido oxidasa (LAO ) y fosfolipasa A,. adicionalmente se determinó la actividad hemorrágica y el efecto edemático con ratones albinos.Los resultados mostraron que la mayor concentración proteica (0,938 mg de proteína / mg de ve neno) asi como el número máximo de bandas proteicas (8 bandas) se obtuvieron co n los venenos de juveni les de 2 años . Asimismo se encontró que algunas actividades enzimáticas como la amidol ítica, fosfolipásica y L-aminoácido oxidas a fueron más altas en los juveniles de 2 años, además de los efec tos hem orrágico y edemático . En cambio, las actividad es coagulante y proleolítica sobre cas eína se elevaron progresivam ente con la edad de los ejemplares. Sin embargo, la enzima hialuronídasa tuvo su máximo va lo r en los juvenil es de 1 año, decreciendo notablemente en los adultos. Es interesante señalar también que foslolipasa A 2 en los adultos sólo tuvo una actividad de 6,4% con respecto al valor más alto encontrado en el veneno de juveniles de 2 años.Palabras clave: Bothrops atrox, serpie nte, veneno, edad, cau tiverio . ABSTRACTBothrops atrox is the main venomous snake in the Amazonic region 01 Peru, because it is responsible 01 the majority of human ophidic accidents. For this reason. variation into chemical compos ition as we ll as enzymatic activities on this venom were studied in relati on to age, considering 3 groups 01 captivity snakes: young 01 1 and 2 years respectively as we ll as adult, major 01 5 years. The venom obtained Irom the three groups was pooled, Iyophilize d and properly dissolved into saline solution.Protein concentration at 280 nm and by Lowry's method was calculated into each venom sample. Besides, protein bands ...
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