Peptide microarrays are ideal tools for a variety of applications ranging from epitope mapping to immune monitoring. Here we present a method for high-throughput screening of biological samples using only standard microtiter plate equipment. Parallel incubation of a large number of samples with a small library of peptides is enabled by printing multiple identical mini-arrays on one microarray slide and further combining four slides to yield an incubation frame possessing the dimensions of a 96-well microtiter plate. Applying conventional lab equipment such as ELISA washers, hundreds of samples can be processed in 1 day yielding approx. 200 data points in triplicates per sample.
Es wird ein impedimetrisches Sensorsystem für den Nachweis von Protein-DNA-Wechselwirkungen vorgestellt. Der Sensor nutzt kurze Thiol-markierte DNA (ssDNA), die über Chemisorption auf Goldchipelektroden immobilisiert wird. Aus den Impedanzspektren wurde der Durchtrittswiderstand (R ct ) als Kenngröße für die zu untersuchenden Wechselwirkungen gewählt. In Anwesenheit des Redoxsystems Ferro-/Ferrycyanid konnte eine Zunahme des Durchtrittswiderstandes nach der Immobilisierung und anschließender Hybridisierung auf der Sensoroberfl äche registriert werden. Der Einsatz längerer Fänger-DNA (25mer im Vergleich zu 18-mer) führte zu einer Abnahme der Konzentration an immobilisierten Fänger-Strängen, aber auch zu einer Vergrößerung der Durchtrittswiderstände sowohl für ssDNA als auch dsDNA. Bei ähnlichen Oberfl ächenkonzentrationen ließ sich eine annähernd gleiche Sensitivität des Hybridisierungsnachweises im Vergleich zu 18-mer Fänger-Strängen erzielen. Mit Hilfe des Elektrodensystems wurde die Nachweisbarkeit von Protein-DNA-Wechselwirkungen untersucht. Die Restriktion doppelsträngiger DNA durch die Restriktionsendonuklease BamHI konnte mit der Zyklovoltammetrie und markierungsfrei mit der Impedanzspektroskopie verfolgt werden. Des Weiteren wurde die sequenzspezifi sche Bindung des Transkriptionsfaktors NF-κB p50 anhand einer Abnahme von R ct impedimetrisch registriert.
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