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A doença de Aujeszky ou pseudoraiva (DA), causada pelo vírus da pseudoraiva (PRV) é a maior preocupação na produção de suínos. No estado do Rio Grande do Sul, Brasil, a DA foi somente detectada em 1954, em bovino. Em 2003, ocorreram dois surtos de encefalite em granjas na região norte do estado, fronteira com o estado de Santa Catarina. O vírus da doença de Aujeszky (VDA) foi isolado a partir de animais coletados em oito granjas distintas da região e submetido a análises antigênicas e moleculares. As amostras de VDA isoladas foram comparadas com as amostras padrão NIA-3 e NP. A caracterização antigênica dos mesmos foi realizada com testes de imunoperoxidase frente a um painel de anticorpos mono-clonais (Mabs) preparado contra epitopos de glicoproteinas virais (gB, gC, gD e gE). A caracterização genômica foi realizada através da análise restrição enzimática (REA) sobre o genoma total das amostras, com a enzima de restrição (REA) Bam HI. O perfil antigênico das oito amostras isoladas no Rio Grande do Sul, bem como os apresentados pelas amostras padrão NIA-3 e NP, foram similares. A REA revelou que todos as oito amostras do Rio Grande do Sul apresentaram um arranjo genômico do tipo II, genótipo frequentemente encontrado em surtos prévios de DA em outros estados do Brasil. Os resultados aqui obtidos indicam que as oito amostras isoladas no Rio Grande do Sul são similares.

Pesq. Vet. Bras. 29(7): 545-551, julho 2009 RESUMO.-[Eficácia de uma vacina inativada, gE-deletada, contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1).] O Herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) é reconhecido como um importante agente de perdas econômicas em bovinos. Vacinação tem sido amplamente empregada para minimizar as perdas conseqüentes a infecções com o BoHV-1. Reportamos previamente o desenvolvimento de uma vacina diferencial para BoHV-1, baseada em um recombinante do qual a glicoproteína gE (gE) foi deletada (265gE -). No presente trabalho foi realizada a avaliação da eficácia de tal recombinante como vacina inativada. Cinco bovinos soronegativos para BoHV-1 foram vacinadas por via intramuscular no dia 0 e revacinadas 30 dias Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) is recognized as a major cause of economic losses in cattle. Vaccination has been widely applied to minimize losses induced by BoHV-1 infections. We have previously reported the development of a differential BoHV-1 vaccine, based on a recombinant glycoprotein E (gE)-deleted virus (265gE -). In present paper the efficacy of such recombinant was evaluated as an inactivated vaccine. Five BoHV-1 seronegative calves were vaccinated intramuscularly on day 0 and boostered 30 days later with an inactivated, oil adjuvanted vaccine containing an antigenic mass equivalent to 10 7.0 fifty per cent cell culture infectious doses (CCID 50 ) of 265gE -. Three calves were kept as non vaccinated controls. On day 60 post vaccination both vaccinated and controls were challenged with the virulent parental strain. No clinical signs or adverse effects were seen after or during vaccination. After challenge, 2/5 vaccinated calves showed mild clinical signs of infection, whereas all non vaccinated controls displayed intense rhinotracheitis and shed virus for longer and to higher titres than vaccinated calves. Serological responses were detected in all vaccinated animals after the second dose of vaccine, but not on control calves. Following corticosteroid administration in attempting to induce reactivation of the latent infection, no clinical signs were observed in vaccinated calves, whereas non vaccinated controls showed clinical signs of respiratory disease. In view of its immunogenicity and protective effect upon challenge with a virulent BoHV-1, the oil adjuvanted preparation with the inactivated 265gE -recombinant was shown to be suitable for use as a vaccine.INDEX TERMS: Bovine herpesvirus type 1, BoHV-1, recombinant vaccine, inactivated vaccine.Pesq. Vet. Bras. 29 (7)

Bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) is a major cause of viral meningoencephalitis in cattle. The expression of different viral proteins has been associated with BoHV-5 neuropathogenesis. Among these, gI, gE and US9 have been considered essential for the production of neurological disease in infected animals. To evaluate the role of gI, gE and US9 in neurovirulence, a recombinant from which the respective genes were deleted (BoHV-5 gI-/gE-/US9-) was constructed and inoculated in rabbits of two age groups (four and eight weeks-old). When the recombinant virus was inoculated through the paranasal sinuses of four weeks-old rabbits, neurological disease was observed and death was the outcome in 4 out of 13 (30.7 %) animals, whereas clinical signs and death were observed in 11/13 (84.6%) of rabbits infected with the parental virus. In eight weeks-old rabbits, the BoHV-5 gI-/gE-/US9- did not induce clinically apparent disease and could not be reactivated after dexamethasone administration, whereas wild type BoHV-5 caused disease in 55.5% of the animals and was reactivated. These findings reveal that the simultaneous deletion of gI, gE and US9 genes did reduce but did not completely abolish the neurovirulence of BoHV-5 in rabbits, indicating that other viral genes may also play a role in the induction of neurological disease.

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The use of monoclonal antibodies (MAbs) has contributed to the diagnosis of avian infectious bronchitis (IB), however their use are still limited because the utilized MAbs are imported, increasing the cost of such methodologies. Therefore, given the relevance of the national poultry production as well as the losses caused by the occurrence of IB in commercial poultry flocks, it is important that Brazil can produce biological supplies to use for diagnostic of IB. Thus, the present work reports the production, and characterization of MAbs against the infectious bronchitis virus (IBV). Two groups of three Balb-c female mice were inoculated with inactivated classic or variant IBV for 10 times, once per week. The splenocytes from mouse with higher serum concentration against IBV antigens were harvested and fused with murine Sp2/O-Ag14 myeloma cells. We generated two hybridomas secreting MAbs anti-IBV (MAb 2G4 and 5A11) from the fusion of myeloma cells and B-lymphocytes from a mouse immunized with the variant IBV. Following the characterization by ELISA and Western Blot, it was observed that MAbs recognize the IBV classic and variant types, showing more intense reactions with IBV variant. The MAbs obtained in this study have potential for use in immunodiagnostic for IB.

Ana Cláudia Franco (Co-orientadora -UFPel) Banca: Amauri Simonetti (UFRGS), Cláudio Wageck Canal (UFRGS), Luciane Teresinha Lovato (UFSM) O herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) é responsável por meningoencefalites necrosantes em bovinos, com prevalência aparentemente mais significativa nos países do hemisfério sul, principalmente Brasil e Argentina. Objetivando um melhor entendimento sobre aspectos de proteção cruzada induzida através da utilização de vacinas contra BHV-1 frente a infecções por BHV-5, o presente estudo envolveu a imunização de coelhos e bovinos com uma vacina recombinante de BHV-1 e subseqüente desafio com uma amostra altamente virulenta de BHV-5. Após o desafio, 2 de 5 coelhos previamente vacinados morreram apresentado sinais neurológicos de meningoencefalite, bem como 3 de 5 coelhos do grupo de animais não vacinados. Quando este experimento foi realizado em bovinos, animais do grupo vacinado desenvolveram sinais brandos de comprometimento nervoso e doença respiratória. No grupo de animais não vacinados, contudo, 2 animais morreram nos dias 7 e 11 pós desafio. No dia 21 pós desafio, 4 de 8 bovinos vacinados e 2 bovinos não vacinados foram sacrificados e apresentaram lesões típicas de BHV-5 no encéfalo. No dia 60 pós desafio, os bovinos remanescentes foram submetidos à administração de dexametasona visando a reativação do vírus. Após a reativação, não foram evidenciados sinais de comprometimento nervoso ou respiratório em ambos os grupos. Contudo, lesões atróficas no encéfalo estavam presentes em 3 animais vacinados bem com em 2 bovinos não vacinados. Conclui-se que a imunização com esta vacina de BHV-1 conferiu proteção parcial a coelhos e bovinos posteriormente desafiados com BHV-5. Como segunda parte deste trabalho, na busca de uma amostra atenuada com potencial para ser utilizada como imunógeno, uma amostra de BHV-5 recombinante com deleções nos genes gI, gE e US9 foi avaliada quanto a seu potencial patogênico, imunogênico e capacidade de reativação utilizando coelhos com idades variando entre 4 e 8 semanas como modelo experimental. Nos coelhos de 4 semanas de idade, o mutante causou doença levando à morte 4 de 13 animais (30,7%) enquanto que a amostra de vírus selvagem levou à morte 11 de13 animais (84,6%). Após o desafio, coelhos previamente vacinados não desenvolveram sinais clínicos compatíveis com infecções por BHV-5 e apresentaram anticorpos específicos para BHV-5. Em coelhos de 8 semanas de idade, o mutante não induziu sinais da doença durante a fase aguda da infecção, enquanto a amostra de vírus selvagem foi fatal para 5 de 9 (55,5%) animais. Após administração de dexametasona, animais inoculados com o vírus recombinante não apresentaram sinais neurológicos nem eliminaram vírus nas secreções nasais, enquanto que no grupo inoculado com o vírus parental houve eliminação de vírus através das secreções nasais durante 10 dias em 100% dos animais. Estes resultados sugerem que o mutante de BHV-5 foi parcialmente atenuado quando testado em coelhos de 4 semanas de idade sendo que animais previame...