Phospholipase D (PLD) is a receptor-regulated signalling enzyme involved in biological functions, such as exocytosis, phagocytosis, actin dynamics, membrane trafficking, and is considered to be essential for stimulated degranulation of cells. The purpose of our investigation was to examine how the fatty acid pattern of cellular membranes influences the activities and cellular distribution of the PLD1 and PLD2 isoforms. Expression of GFP-tagged PLD1 and PLD2 in COS-1 cells that were stimulated with mastoparan after cultivation in 20 micromol linoleic (C18:2n6) or linolenic (C18:3n3) acid for 4 d demonstrated that PLD1 dramatically alters its cellular distribution and is redistributed from intracellular vesicles to the cell surface. PLD2, on the other hand, maintains its localisation at the plasma membrane. The activity of PLD, which corresponds to PLD1 and PLD2, significantly increased two- to three-fold in the presence of the fatty acids. We conclude that linoleic acid and linolenic acid supplementation affect the intracellular trafficking of the PLD1 isoform and the activity of PLD most likely due to alterations in the membrane lipid environment conferred by the fatty acids.

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Zusammenfassung Gegenstand und Ziel: In der vorliegenden Arbeit wird erstmals eine Methode zur Geschlechtsbestimmung mittels Polymerasekettenreaktion (PCR) beim Lachenden Hans (Dacelo gigas) vorgestellt. Material und Methoden: Es wurden Federkiele und Blut von sieben Vögeln untersucht, wovon zwei Tiere bekannten Geschlechts als Kontrolle dienten. Die Aufbereitung der Proben erfolgte durch alkalische Extraktion mit NaOH. Daraufhin wurde der DNA-Gehalt im Überstand mittels UV-Spektroskopie gemessen und die gewonnene DNA in einer PCR nach einer Methode von Fridolfsson und Ellegren (1999) eingesetzt. Die dort beschriebenen Primer bilden die Voraussetzung für die Vervielfältigung eines für Geschlechtschromosomen spezifischen Genabschnitts, einem Teil des aviären CHD-1-Gens (Chromo-Helicase-DNA-Bindungsprotein). Basis für die Unterscheidung stellen Sequenzunterschiede zwischen dem CHD-1W-und dem CHD-1Z-Gen dar. Die für W-und Z-Chromosom unterschiedlich langen Amplifikate des CHD-1-Gens wurden gelelektrophoretisch aufgetrennt, mit Ethidiumbromid angefärbt und mittels UV-Licht sichtbar gemacht. Ergebnisse: Das Geschlecht aller sieben untersuchten Tiere konnte erstmals auf molekularer Ebene sicher bestimmt werden. Schlussfolgerung und klinische Relevanz: Mit dieser Methode besteht nun auch für den Lachenden Hans die Möglichkeit einer schonenden Geschlechtsbestimmung zum Zwecke einer erfolgreichen Zucht und artgerechten Haltung.