Імуноферментний Метод Визначення Лізоциму Слизу Та Тканин Риб

Abstract

The possibility of using the immunoferment analysis for determination of lysozyme of mucus and fish tissues has been investigated. This method was adapted by reducing the dilution of the supernatant of biological material with buffer from 1:5 to 1:1. Clinically healthy fish (10 samples of pike and 10 samples of carp) were taken from fish ponds at water temperature of 14-16ºC. Biological material (blood, spleen, mucus of superficial integuments) was selected concerning the commonly used methods in ichthyopathology. The determination of lysozyme activity was carried out using high sensitivity RIDASCREEN ® FAST Lysozym test kit. When diluting the supernatant of biological material with buffer in a ratio of 1:5 (according to the method), it was not possible to calculate the data by the calibration curve, since the lysozyme parameters of the samples were lower than the lysozyme standard (0,050 mkg/g). Therefore, the final dilution was reduced and the experiment was continued with dilution of the supernatant with a protein extraction buffer in a ratio of 1:1. The data of the statistical processing of the results have led to conclusion the use of RIDASCREEN ® FAST Lysozym test kit in the proposed modification for the immunoferment analysis of lysozyme activity in tissues and mucus of fish is possible. A high content of lysozyme was noted in the mucus of the superficial integuments of fish, the lowest -in the blood serum. The content of lysozyme in the tissues and organs of pike is higher than in carp. Досліджена можливість використання методу імуноферментного аналізу для визначення лізоциму слизу і тканин риб. Для цього методику імуно-ферментного аналізу для визачення лізоцимної активності було адаптовано за рахунок зменшення розведення супернатанту біологічного матеріалу буфером з 1:5 до 1:1. Для досліджень брали клінічно здорову рибу ( по 10 екземплярів щуки та коропа з рибницьких ставів) за температури води 14-16ºС. Біологічний матеріал (кров, селезінку, слиз поверхневих покривів) відбирали згідно загальноприйнятих в іхтіопатології методів. Визначення лізоцимної активності проводили методом імуноферментного аналізу за допомогою тест-набору RIDASCREEN ® FAST Lysozym, перевагою якого є висока чутливість. За розведення супернатанту біологічного матеріалу буфером 1:5 (згідно методики) дані не піддавались обрахунку за калібрувальною кривою, оскільки показники лізоциму зразків були нижчі за показники стандарту лізоциму (0,050 мкг/г) на калібрувальній кривій. Тому було зменшено кінцеве розведення і дослід продовжили із розведенням супернатанту буфером екстракції білку у співвідношенні 1:1. Дані статистичного опрацювання результатів дозволили зробити висновок про придатність використання тест-набору RIDASCREEN ® FAST Lysozym в запропонованій модифікації для імуноферментного аналізу лізоцимної активності в тканинах та слизу риб. Найвищий вміст лізоциму відмічали у слизу поверхневих покривів риб, найнижчий -у сироватці крові. Вміст лізоциму у тканинах та органах щуки вищий ніж у коропа.Ключові слова: риба, щука, короп, гумора...

Molecular Aggregation in Immune System Activation Studied by Dynamic Light Scattering

“…The most common method of determining the concentration of immune complexes is the ELISA test. However, it demands a set of enzymes, markers, and reagents so it is currently impossible to implement it for regular screening of the 2 of 13 population [6,7]. The opposite disadvantages belong to hemolytic tests, used to assess the activity of the immune system in general.…”