Σχεδιασμός Σύνθεση Και Αξιολόγηση Αναλόγων Των Ανοσοκυρίαρχων Επιτόπων Των Προτεϊνών Της Μυελίνης Που Εμπλέκονται Στη Σκλήρυνση Κατά Πλάκας

Abstract

Το αντικείμενο της παρούσας διατριβής ήταν η ανάπτυξη νέων ενώσεων, αναλόγων των ανοσοκυρίαρχων επιτόπων των πρωτεϊνών της μυελίνης, που εμπλέκονται στη Σκλήρυνση Κατά πλάκας (ΣΚΠ). Συγκεκριμένα, μελετήθηκαν δύο διαφορετικές στρατηγικές, που πιθανώς θα μπορούσαν να αποτελέσουν βάση για την ανάπτυξη νέων προσεγγίσεων στην αντιμετώπιση της ασθένειας. Για το σκοπό αυτό συντέθηκαν πεπτιδικά ανάλογα με βάση τους ανοσοκυρίαρχους επιτόπους MOG35-55 και MBP85-99. Η πρώτη προσέγγιση στοχεύει στην ανοχή του ανοσοποιητικού συστήματος μέσω των δενδριτικών κυττάρων, με τη χρήση πεπτιδικών αναλόγων συζευγμένων με τον πολυσακχαρίτη μαννάνη (πολυμανόζη). Τα συντιθέμενα ανάλογα χρησιμοποιήθηκαν σε πειράματα τοξικολογικής, in vivo και in vitro αξιολόγησης. Πραγματοποιήθηκε σύζευξη πεπτιδικών αναλόγων στη μαννάνη μέσω μιας γέφυρας [KG]5. Αναπτύχθηκε μεθοδολογία SDS-PAGE για τον έλεγχο των συζευγμάτων, καθώς και για τον προσδιορισμό βέλτιστων συνθηκών σύζευξης. Επίσης πραγματοποιήθηκε μελέτη σταθερότητας του συζεύγματος Mannanoxidized-[KG]5MOG35-55(Pro42).Η δεύτερη προσέγγιση, περιλαμβάνει το σχεδιασμό τη σύνθεση και την αξιολόγηση ενός συζεύγματος που αποτελείται από τον επίτοπο MBP85-99 και τροποποιημένη ανθρακινόνη. Η σύζευξη πραγματοποιήθηκε μέσω μια γέφυρας (Ahx)6 και δισουλφιδικού δεσμού, με στόχο να επιτευχθεί επιλεκτική ανοσοκαταστολή του ανοσοποιητικού συστήματος. Το συντιθέμενο ανάλογο αξιολογήθηκε για την ανασοκατασταλτική του δράση στην ανθρώπινη καρκινική σειρά Jurkat. Επίσης, πραγματοποιήθηκαν μελέτες ανοσοφθορισμού για τον εντοπισμό του στο κύτταρο και για τον ρόλο του δισουλφιδικού δεσμού σε συνδυασμό με τη δράση της αναγωγάσης της θειορεδοξίνης. Διαπιστώθηκε επιπλέον, η ικανότητα πρόσδεσης του συζεύγματος με την πρωτεΐνη HLA II DRΒ1-1501, η οποία έγινε προσπάθεια να εκφραστεί και να απομονωθεί από την κυτταρική σειρά HEK293, μέσω τεχνικής ανασυνδυασμένου DNA. Προέκταση της μελέτης αυτής είναι η ενσωμάτωση του συζεύγματος σε HLA II ειδικά-τετραμερή τα οποία θα χρησιμοποιηθούν για in vivo και in vitro αξιολόγηση. Τα εγκεφαλιτογόνα Τ κύτταρα, δύναται να αναγνωρίσουν το πεπτιδικό ανάλογο το οποίο θα βρίσκεται σε τετραμερές, με αποτέλεσμα την προσέγγιση σε αυτά της ανοσοκατασταλτικής ένωσης που θα μπορούσε να τα οδηγήσει σε επιλεκτική ανοσοκαταστολή.