Μελέτη Της Επίδρασης Μικρορευμάτων Σε Κυτταρικούς Πληθυσμούς

Abstract

Η δημιουργία ενός έλκους στο δέρμα ή στα οστά μπορεί να οφείλεται σε διάφορους παράγοντες και έχει ως αποτέλεσμα τη διακοπή της φυσιολογικής δομής και λειτουργίας του τραυματισμένου ιστού. Η επούλωση του έλκους είναι μία διαδικασία, αρκετά σημαντική για όλους τους οργανισμούς, που αποτελείται από τέσσερα διαδοχικά και αλληλεπικαλυπτόμενα στάδια. Διακοπή ή παρατεταμένη διάρκεια ενός σταδίου μπορεί να οδηγήσει σε ένα χρόνιο έλκος. Τα τελευταία χρόνια η ηλεκτροδιέγερση με τη μορφή μικρορευμάτων έχει αρχίσει να χρησιμοποιείται για την επιτάχυνση της επουλωτικής διαδικασίας στο δέρμα ή στα οστά καθώς έχει βρεθεί ότι συμβάλλει σε κάθε φάση επάγοντας τη μετανάστευση και τον πολλαπλασιασμό διαφόρων τύπων κυττάρων και την έκκριση σημαντικών αυξητικών παραγόντων. Στην παρούσα εργασία χρησιμοποιήθηκε μία συσκευή ασύρματης μικροηλεκτροδιέγερσης, για την παραγωγή των μικρορευμάτων, η οποία σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες έχει αποδειχθεί ότι οδηγεί σε πλήρη επούλωση σε ασθενείς με χρόνια έλκη. Οι αλλαγές που προκαλούνται σε μοριακό επίπεδο μελετήθηκαν σε δύο διαφορετικές κυταρικές σειρές: ινοβλάστες (ΝΙΗ3Τ3) και ανθρώπινη κυτταρική σειρά οστεοσαρκώματος, που παρουσιάζει οστεοβλαστικά χαρακτηριστικά (MG-63). Σύμφωνα με τα αποτελέσματά μας, μετά τη μεταφορά -916 μC O2- στα ΝΙΗ3Τ3 κύτταρα και -414 μC O2- στα MG-63 έχουμε μέγιστη ενεργοποίηση των ΜΑΡ κινασών ERK 1/2 και p38, οι οποίες έχει βρεθεί ότι συμμετέχουν σε διάφορες κυτταρικές λειτουργίες, όπως ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός και η μετανάστευση. Επιπλέον, η διέγερση με μικρορεύματα επάγει και στις δύο κυτταρικές σειρές τον πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση με έναν phospho-ERK 1/2 ή phospho-p38 εξαρτώμενο τρόπο. Μελέτη της επίδρασης των μικρορευμάτων στην έκκριση του αυξητικού παράγοντα TGF-β1 έδειξε ότι έπειτα από μεταφορά του κατάλληλου αριθμού φορτίων, σε κάθε κυτταρική σειρά αυξάνεται η συγκέντρωση του TGF-β1, σε σύγκριση με τα κύτταρα control και αυτό συμβαίνει με έναν phospho-ERK 1/2 και phospho-p38 εξαρτώμενο τρόπο. Περαιτέρω διερεύνηση του μεταγραφικού προφίλ των κυττάρων έδειξε ότι τα μικρορεύματα προκαλούν αλλαγές την έκφραση διαφόρων γονιδίων και οδηγούν στην ενεργοποίηση σηματοδοτικών μονοπατιών, όπως είναι το TGF-β, το MAPK και το Hedgehog. Συμπερασματικά, η παρούσα μελέτη παρουσιάζει ένα απλό πειραματικό μοντέλο για την ταυτοποίηση των μοριακών μηχανισμών που ενεργοποιούνται μετά την εφαρμογή των μικρορευμάτων σε δύο διαφορετικές κυτταρικές σειρές που συμμετέχουν στην επούλωση ελκών και καταγμάτων. Παρόλ’ αυτά, χρειάζεται να γίνει περαιτέρω έλεγχος με πειράματα σε καλά οργανωμένα συστήματα, προκειμένου να μελετηθούν και εκεί οι αλλαγές που προκαλούνται μετά την επίδραση των μικρορευμάτων, καθώς κάποια από τα σηματοδοτικά μονοπάτια, που αποδείχθηκε ότι ενεργοποιούνται, μπορεί να οδηγούν σε αρνητικές επιπτώσεις για τον ασθενή (όπως το Hedgehog και το μονοπάτι της MAP κινάσης p38).