Μελετη Γλυκοζαμινογλυκανων Και Πρωτεογλυκανων Σε Κακοηθες Μεσοθηλιωμα

Abstract

Μελέτη γλνκοζαμινογλυκανών και πρωτεογλυκανών σε κακόηθες μεσοθηλίωμα» ΔΙΔΑΚΤΟΡΙΚΗ ΔΙΑΤΡΙΒΗ Αλεξάνδρα Συρόκου Χημικός Πάτρα 1998 2.7.1.4 Η γλυπικάνη (Glypican) 42 2.7.1.5 Βηταγλυκάνη (Betaglycan) 43 2.7.2 Μεμβρανικές πρωτεογλυκάνες θειικής χονδροϊτίνης / δερματάνης 43 2.7.2.1 Θρομβομοντουλίνη (Thrombomodulin) 43 2.7.2.2 CD44 44 Περιεχόμενα 2.8. Εξωκυττάριες πρωτεογλυκάνες 2.8.1 Βερσικάνη (versican) 2.8.1 Αγκρικάνη (Aggrecan) 2.8.3 Περλεκάνη (Perlecan) 2.8.3 Διακοσμητίνη, Διγλυκάνη και Ινομοντουλίνη (Decorin, Biglycan, Fibromodulin) 3. Οι αυξητικοί παράγοντες 52 3.1 TGF-ß (Transforming Growth Factor) 3.2 FGF (Fibroblast growth factor) 54 3.3 EGF (Epidermal growth factor) 3.4 IGF-1 (Insulin-like growth factor) 3.5 PDGF (Platelet-derived growth factor) 4. Πρωτεογλυκάνες και μεσοθηλίωμα 56 4.1. Γλυκοζαμινογλυκάνες και μεσοθηλίωμα 4.1.1. Υαλουρονικό οξύ και μεσοθηλίωμα 5 Αυξητικοί παράγοντες και μεσοθηλίωμα 5.1 Επίδραση των αυξητικών παραγόντων στην σύνθεση των γλυκοζαμινογλυκανών στο μεσοθηλίωμα ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΜΕΛΕΤΗΣ 61 ΠΕΙΡΑΜΑ ΤΙΚΟ ΜΕΡΟΣ 65 Ι. Προσδιορισμός του mRNA των πρωτεογλυκανών με RT-PCR 67 Π. Βιοχημική μελέτη των πρωτεογλυκανών 68 ΠΙ. Μελέτη της δράσης των αυξητικών παραγόντων στην σύνθεση των πρωτεογλυκανών 69 IV. Μελέτη της δράσης της γενιστεΐνης στην επαγόμενη σύνθεση των πρωτεογλυκανών από τους αυξητικούς παράγοντες. 70 V. Μελέτη της δράσης των γλυκοζαμινογλυκανών, αυξητικών παραγόντων και του συνδυασμού τους στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του μεσοθηλιώματος 71 1. Κυτταρικές σειρές 72 2. Κυτταρικές καλλιέργειες 72 3. Επισήμανση και εμπλουτισμός των πρωτεογλυκανών 73 6 Περιεχόμενα 4. Εκχύλιση των μεμβρανικών πρωτεογλυκανών 5. Μελέτη της δράσης των γλυκοζαμινογλυκανών και αυξητικών παραγόντων στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό 6. Ενζυμικές κατεργασίες 6.1 Ενζυμική κατεργασία με χονδροϊτινάσες ABC/AC και χονδρό -4 και -6-σουλφατάσες 74 6.2 Ενζυμική κατεργασία με χονδροϊτινάση Β 75 6.3 Ενζυμική κατεργασία με ηπαρινάσες 6.4 Ενζυμική κατεργασία με κερατανάση 76 7. Χημικές κατεργασίες 7.1. Κατεργασία με ΗΝ0 2 σε χαμηλό pH 8. Αναλυτικές μέθοδοι 76 8.1 Χρωματομετρικές μέθοδοι 8.1.1 Μέθοδος προσδιορισμού Ν -θειονυλιωμένης εξοζαμίνης 8.1.2 Μέθοδος προσδιορισμού ολικής εξοζαμίνης 8.2 Χρωματογραφικές μέθοδοι 8.2.1 Χρωματογραφία ανιοανταλλαγής 8.2.2 Χρωματογραφία μοριακής διήθησης 8.3 HPLC μέθοδοι 8.3.1 Προσδιορισμός γλυκουρονικού και ιδουρονικού οξέος 78 8.3.2 Προσδιορισμός δισακχαριτών HA και CS/DS 8.3.3 Προσδιορισμός δισακχαριτών ηπαρίνης και HS 8.4 Ηλεκτροφορητικές μέθοδοι 79 8.4.1 SDS-PAGE 79 8.4.2 Ηλεκτροφόρηση αγαρόζης 80 8.5 Ανοσολογικές μέθοδοι 81 8.5.1 Ανοσοενζυμική μέθοδος κηλίδας (Dot-blot) 81 8.5.2 Ανοσοαποτύπωση (Western Blotting) 81 9. Ανάλυση Ανάστροφης Μεταγραφάσης -Αλυσιδωτής Αντίδρασης Πολυμεράσης (RT-PCR) 83