Γονίδια Που Κωδικοποιούν Παράγοντες Που Συμμετέχουν Στην Ενδοκυτταρική Κυκλοφορία Και Τοποθέτηση Στη Μεμβράνη Μεταφορέων Όξινων Αμινοξέων

Abstract

Πρόλογος 1. Εισαγωγή 1.1. O µύκητας Aspergillus nidulans ως πρότυπο µικροβιακό σύστηµα 1.2. Συστήµατα µεµβρανικής µεταφοράς 1.2.1. Μεταφορά ουσιών διαµέσου της µεµβράνης 1.2.2. Ταξινόµηση των συστηµάτων µεταφοράς 1.2.3. Μεταφορείς αµινοξέων 1.2.4. Μεταφορείς αµινοξέων µυκήτων Μεταφορείς αµινοξέων της υπεροικογένειας APC 1.2.5. Μεταφορείς αµινοξέων του S. cerevisiae 1.2.6. Οι µεταφορείς αµινοξέων του A. nidulans Μεταφορέας προλίνης PrnB Μεταφορέας γ-αµινοβουτυρικού οξέος GabA Μεταφορέας όξινων αµινοξέων AgtA 1.2.7. Μεταφορείς όξινων αµινοξέων σε άλλους οργανισµούς 1.3. Ενδοκυτταρική πορεία διαµεµβρανικών πρωτεϊνών Τοπογένεση µεταφορέων αµινοξέων µυκήτων 1.3.1. Ενσωµάτωση στη µεµβράνη του ενδοπλασµατικού δικτύου 1.3.2. Από το ενδοπλασµατικό δίκτυο στο σύµπλεγµα Golgi 1.3.3. Σύµπλεγµα Golgi-Πλασµατική µεµβράνη-Χυµοτόπια: τα τελικά στάδια του εκκριτικού µονοπατιού 1.3.4. Η εµπλοκή της διπλοστιβάδας λιπιδίων στην υποκυτταρική κατανοµή των µεταφορέων αµινοξέων 1.3.5. Μετα-µεταφραστική πορεία µεταφορέων όξινων αµινοξέων 1.4. Η έκκριση και η ενδοκύτωση στον A. nidulans Πρωτεϊνικοί παράγοντες που ρυθµίζουν την έκφραση των µεταφορέων αµινοξέων του A. nidulans σε µετα-µεταγραφικό επίπεδο 1.5. Σκοπός διδακτορικής διατριβής 2. Υλικά και Μέθοδοι 2.1. Μικροβιακά στελέχη, θρεπτικά υποστρώµατα και συνθήκες ανάπτυξης 2.1.1. Στελέχη Α. nidulans, θρεπτικά υποστρώµατα και συνθήκες ανάπτυξης 2.1.2. Στελέχη Escherichia coli, θρεπτικά υποστρώµατα και συνθήκες ανάπτυξης 2.2. Γενετικές µέθοδοι µελέτης µυκήτων 2.2.1. Γενετικός µετασχηµατισµός πρωτοπλαστών στελεχών του Α. nidulans 2.2.2. ∆ιασταυρώσεις στελεχών A. nidulans (σχηµατισµός ετεροκαρύου, ανάλυση ανασυνδυασµένων κλειστοθηκίων) 2.3. Μέθοδοι µελέτης του DNA 2.3.1. Αποµόνωση πλασµιδιακού DNA από το βακτήριο E. coli 2.3.2. Ενίσχυση γονιδιωµατικής βιβλιοθήκης prG3-AMAI-NotI του Α. nidulans 2.3.3. Αποµόνωση γονιδιωµατικού DNA από τον Α. nidulans 2.3.4. Ενίσχυση τµηµάτων DNA µε τη µέθοδο της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυµεράσης (Polymerase Chain Reaction, PCR) 2.3.5. Ιn vitro ανασυνδυασµός τριών µορίων DNA µε τη µέθοδο της Double-Joint PCR (D-J PCR) Ανάπτυξη ασκού Μίτωση Οκτώ απόγονοι σε οκτώ ασκοσπόρια Μίτωση Ασκός που περιέχει οκτώ διπύρηνα ασκοσπόρια Κλειστοθήκιο Κύτταρα Hülle ∆ιπύρηνα ασκοσπόρια Εκβλάστηση Αναδυόµενες υφές Προµειωτικές ασκογόνες υφές ∆ικάρυο που σχηµατίζεται µέσα στο ανώριµο κλειστοθήκιο Συνδεδεµένες πυρηνικές διαιρέσεις Κυτταρική διαίρεση Φυλετικός κύκλος Crozier Βασικό κύτταρο ∆ιπύρηνο κύτταρο µε διαφορετικούς πυρήνες Ακραίο κύτταρο Καρυογαµία διαφορετικών πυρηνών ∆ιπλοειδές κύτταρο Μείωση διπλοειδούς κυττάρου, σύντηξη ακραίου και τρίτου κυττάρου Πολλαπλές πολυτοκίες των συνδεδεµένων πυρηνικών διαιρέσεων προς δηµιουργία ασκών από τα ίδια ζεύγη πατρικών πυρήνων Βλαστητική υφή Ετεροκάρυο (n+n) ∆ιπλοειδές (2n) Παραφυλετικός κύκλος Απλοειδοποίηση Βλαστητική υφή Οµοκάρυο (n) Βλαστητική υφή Αναδυόµενη υφή Εκβλάστηση Ισοτροπική ανάπτυξη Μονοπύρηνο κονιδιοσπόριο Κονιδιοσπόρια Ώριµος κονιδιοφορέας Φιαλίδια Μετούλες Ποδικό κύτταρο Στέλεχος Κεφαλή Αφυλετικός κύκλος Εικόνα 1.1: Σχ...