Zur Gaschromatographischen Bestimmung Von Cholesterol in Lebensmitteln

Abstract

In der vorliegenden Arbeit soll die Anwendbarket der gaschromatographiechen Bestimmung von Cholesterol in Lebensmitteln (Methode A) im Vergleich zur kolorimetrischen (Methode B) (1) und enzymatischen (Methode C) (2) iberpriiU werden.Durchfiihrung der gaschromatographischen Bestimmung in Anlehnung a n KOVACS, A = ON und ACKMA N (3) 0,5 bis 2,0 g homogenisiertes U&ersuchungsmaterial werden in ein 3O-ml-Zextrifugenglas eirgewogen (die Probe soll ungefghr 0,5 bis 1.5 mg Cholesterol edha2ten). Nach Zugabe von 4 m l ethanolischer Kalilauge (frisch hergestellt aus 25 ml Ethanol, 9@,ig, 5 m l Wasser und 5 g Kaliumhydroxbd) wird die Probe unter gelegentlichem Rtihren 15 rnin in einem Wasserbad auf 66 C erhitzt. Nach Abkiihlen auf Zimmertemperatur und Zugabe von 5 m l Wasser wird 5mal rnit je 5 ml Hexan extrahiert. Bei einer schlecnen Phasentre nnung muR 4 min bei 3000 V/min zentrifilgiert werden. und mit 1 , O ml Hexan aufgenommen. 3 &11 dieser LBsung werden zur gaschromatographischen Analyse unter nachstehenden Bedilgungen verwendet: Chromatron-Gaschromatograph GCHF 18.3 Flammenionisat ionsdet ektor Glastrennskle ( L m e 100 cm, Innendurchmesser 3 mm) T r k e r m a t e r i a l : Chromosorb W-AW-DMCS, 80/100 mesh Trennflitssigkeit: 3 ' % OV-1 Shlentemperatur: 260 "C Injektor-und Detektortemperatur: 290 OC Trt@ergas: 40 m l Stick+aff/miri Eilgangswiderstand: 1 0 &?Empfindlichkeit: 1 Die Retentionszeit fUr Cholesterol b&r#gt 2 min. men, indem Eichlbungen in Konzentrafionen von 150 bis 1500 mg Cholesterol/l Hexan hergestel€t und urter den gleichen Bedingumen wie die Probenlbungen injiziert werden. Die vereinigten Extrakte werden i n einem 25-mlSptzkolben zur Trockne gedampfi Zur quartitafiven Auswertung wird eine Eichung m t 8uLuOerem Standard vorgenom-Ergebnisse und Diskussion Zur Ermittlung der Reproduzierbarket wurden die Standardabweichungen der beschriebenen Mkhoden bei zwei verechiedenen Lebensmftteln bestimmt fTab. 1). Die enzymatische und gaschromatographische Methode aind demnach in der Genauigkeft vergleichbar und weisen eine bessere Prilzision als daf~ klassische kolorimetrische' Verfahren auf (4). Die mft der letzteren Bestimmung gefundenen hBheren Cholesterolgehalte lassen sich durch die geringere S p e z i f t t erkliiren (5). Die gaschromatqraphische Mikrobestimmung von Cholesterol ist im Vergleich zu anderen gebr3uchlichen Met hoden ein vereinfacttes Verfahren. Sie ist empfindlich, zeitsparend und kommt rnit geringen Lkungsmfttel-und Chemikalienmelgen aus. Voraussicitlich ist sie bei einer groBen Anzahl von Lebensmitteln anwendbar. Nach Tab. 2 liegen die Wiederfindungsrafen zwischen 98,l und 100.3 (%. Me gefundenen Cholesterolgehalte einiger Lebensmttel (2.B. mageres Schweinefleisch 38, mageres Rindfleisch 49, Frische RahmbMer, 45 % Fett, 82 mg/lOO g) stimmen