Zur Bestimmung der katalytischen Aktivität der Lipase mit 2,3-Dimercapto-1-propanol-tributyrat als Substrat

Abstract

Zusammenfassung: In der vorliegenden Arbeit wurde der von Kurooka et al. (J. Biochem. Tokyo 81, 361-369 (1977)) ausgearbeitete Zweipunkttest zur Bestimmung der Lipase mit 2,3-Dimercapto-l-propanol-tributyrat als Substrat und mitEllmans Reagens als Akzeptor der freigesetzten Thiolgruppen eingehend untersucht. Bei der Prüfung des zeitlichen Ablaufs der enzymatischen Hydrolyse des Substrats wurde eine ausgeprägte lag-Phase beobachtet, die durch Zusatz von Na-Glykocholat beeinflußbar ist. Zwischen der eingesetzten Serummenge und der Konzentration der freigesetzten SH-Gruppen besteht keine Proportionalität, Die von den Autoren empfohlene Vorinkubation der Probe mit dem Esteraseinhibitor Phenylmethylsulfonylfhiorid reicht zur vollständigen Hemmung der Serumesterasen nicht aus. Die Wirkung des im Testsystem enthaltenen Na-Dodecylsulfats ist nicht geklärt; im kontinuierlichen titrimetrischen Test mit Triolein als Substrat wirkt die Substanz als starker Hemmstoff der Lipase. In Vergleichsuntersuchungen an 104 Seren wurden signifikante Abweichungen von den Ergebnissen der Titrimetrie gefunden. Möglichkeiten zu einer grundlegenden Verbesserung des Testsystems mit Thioestem als Substrat werden diskutiert. Determination oflipase with 2,3-dimercapto-l-propanol-tributyrate äs SubstrateSummary: The two point test for the determination oflipase by Kurooka et al. (J. Biochem. Tokyo 81, 361-369 (1977)) was studied in detail. This procedure uses 2,3-dimercapto-l-propanol-tributyrate äs Substrate and Ellman's reagent äs an acceptor for the released thiol groups. The time course of the enzymic hydrolysis of the Substrate showed a pronounced lag phase, which can be influenced by sodium glycocholate. There is no proportionality between the quantity of added serum and the concentration of released thiol groups. Preincubation of the sample with the esterase inhibitor, phenylmethylsulphonylfluoride, äs recommended by the authors, does not completely inhibit the serum esterase activity. The action of sodium dodecyl sulphate, which is included in the test System, is rtot explained; in the continuous titrimetric test with triolein äs Substrate, it acts äs a powerful lipase inhibitor. Using 104 serum samples, significant differences were found between the results from this method and those obtained by the titrimetric determination oflipase. Possible fundamental improvements of this test system, using thioesters äs Substrate, are discussed. Einführung