Zusammenfassung: Die NADP®-abhängige Aldehyd-Dehydrogenase von Acinetobacter calcoaceticus ist nach unseren früheren Befunden ein induzierbares Enzym aus intracytoplasmatischen Inclusionsmembranen. Wir gewannen es als Detergens/Phospholipid-Mischmicelle und demonstrieren in vorliegender Arbeit Ergebnisse zur kinetischen Charakterisierung dieses Enzyms. Die Aldehyd-Dehydrogenase hat ein pH-Optimum um pH 10 und wird durch Aldehydüber-schuß gehemmt. Der A^-Wert für NADP e liegt -unabhängig von der Kettenlänge der Aldehydsubstrate -bei 8.6 x IGT 5 M. Die K m -Werte für die Aldehyde fallen mit steigender Kettenlänge ab (von 1.6 l ( 3 beiButanal auf 1.5 10~6 bei Decanal). Auch die K { -Werte (für die Hemmung durch Aldehydüberschuß) sinken mit wachsender Kettenlänge von 7.5 10~3 (bei Butanal) auf 3.5 10~5M (bei Decanal) ab, genauso wie die Aldehyd konzentrationen, die jeweils die "optimale" Reaktionsgeschwindigkeit bedingen (bei Butanal 5mM, bei Decanal 6 ). Die Anzahl der inhibierenden Aldehydmoleküle pro Enzym-Substrat-Komplex beträgt n= 1. Das Enzym wird durch NADPH als Produkt gehemmt, nicht dagegen durch Fettsäuren. Eine Rückreaktion konnte nicht gemessen werden. Nicht-kompetitive Inhibitoren des Enzyms sind Sn 2 *, Fe 20 , Cu 2e , BOi e , CN 9 , EDTA, o-Phenanthrolin, p-Chlormercuribenzoat, Mercaptoethanol, Phenylmethylsulfonylfluorid und Diisopropylfluorophosphat, nicht dagegen lodacetat. Chloralhydrat ist ein kompetitiver Inhibitor gegen die Aldehyde. Aktivierend wirkte -abhängig von der Kettenlänge der AldehydeButansäure-ethylester.
Kinetics of membrane-bound aldehyde dehydrogenase of Acinetobacter calcoaceticusSummary: In recent investigations we were able to demonstrate that the NADP®-dependent aldehyde dehydrogenase of Acinetobacter calcoaceticus is an inducible enzyme localized in intracytoplasmic membranes limiting alkane inclusions. Long-chain aliphatic hydrocarbons and alkanols are inducers of the enzyme. It was purified by us and now kinetically characterized using the enzyme-micelle form, which contains bacterial phospholipids and a detergent (sodium cholate), too.The pH optimum of aldehyde dehydrogenase was determined to be at pH 10. The enzyme showed substrate inhibition (by aldehyde excess). The K s and K m values of the leading substrate NADP® were found to be 8.6 10~5 and 10.3 10~5M independent of the chain-length of the aldehydes. The K m values of the aldehydes decreased depending on increasing chain-length (butanal: 1.6 10~3, decanal: 1.5 10~6M).The K { values (for inhibition by aldehyde excess)