VIABILIDADE IN VITRO APÓS VITRIFICAÇÃO DE BLASTOCISTOS DE Mus domesticus domesticus CULTIVADOS A PARTIR DE EMBRIÕES DE 1-CÉLULA

Abstract

Foram realizados três experimentos para se avaliar o desenvolvimento in vitro de blastocistos de Mus domesticus domesticus (CF1xSWISS) cultivados a partir de embriões de 1-célula, após exposição e vitrificação em solução crioprotetora contendo 9,0 M de EG acrescido ou não de 0,3 M de SAC. No experimento 1, após o cultivo de 755 embriões de 1-célula, foram observadas taxas de eclosão de 53,0% para o meio HTF e de 61,7% para o meio KSOM (P>0,05), suplementados com 4 mg/ml de BSA + 20 e 25 mM de HEPES. No experimento 2 testaram-se os possíveis efeitos tóxicos ds soluções crioprotetoras propostas: VS1 = 1,8 M EG em PBS + 6% BSA (60 s) seguido de 9,0 M EG em PBS + 6% BSA (imersão direta) e VS2 = 9,0 M EG + 0,3 M SAC em PBS + 6% BSA (imersão direta) em 152 blastocistos cultivdos a partir de embriões de 1-célula em meio KSOM com 25 mM de HEPES. Não houve diferença significativa (P>0,05) entre os grupos controle (86%), VS1 (82,3%) e VS2 (78,4%). No experimento 3, 140 blastocistos cultivados por 72 h em meio KSOM com 4 mg/ml modificadas (OPSm) nas soluções crioprotetoras acima descritas, alcançando taxas de eclosão de 45,7 e 41,4% para VS1 e VS2 (P>0,05), respectivamente. Portanto, concluiu-se que ambos os meios, HTF e KSOM acrescidos de BSA e HEPES, proporcionaram o completo desenvolvimento embrionário in vitro. Apesar de não ter ocorrido diferença estatística (P>0,05), no meio KSOM observou-se que os embriões tiveram uma curva de crescimento mais homogênea e melhores taxas de eclosão, representando mais uma alternativa para o cultivo de embriões de 1-célula. Igualmente, não houve variação significativa (P>0,05) nas taxas de eclosão para os blastocistos de Mus domesticus domesticus vitrificados nas soluções crioprotetoras contendo 9,0 M de EG com ou sem o acréscimo de 0,3 M de SAC.