Viabilidade dos espermatozoides criopreservados de touros colhidos do epidídimo após 12 horas a 4ºC

Abstract

ResumoO objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da refrigeração do epidídimo, sobre a viabilidade dos espermatozoides congelados. Foram colhidos dez pares de testículos/epidídimos de um abatedouro comercial. Um dos epidídimos foi refrigerado a 4°C durante 12 horas e o contralateral foi imediatamente processado. O epidídimo foi isolado, as células espermáticas extraídas e analisadas quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia e integridade da membrana. Após a análise, os espermatozoides foram congelados em diluente Botubov ® (Botupharma Biotecnologia Animal, Botucatu, SP, Brasil) e descongelados para análise. O mesmo procedimento foi realizado com o testículo/epidídimo refrigerado. Os resultados evidenciaram maior viabilidade (p≤0,05) das células pré-congelação para os parâmetros, número total de espermatozides (1,9 ± 1,2 versus 0,9 ± 0,9 x 10 9 espermatozoides), motilidade (74,0 ± 15,1 versus 20,5 ± 13,8%) e vigor (3,7 ± 0,5 versus 1,7 ± 0,8), e pós-congelação, motilidade (23,5 ± 16,7 versus 8,0 ± 7,9%) e vigor (2,0 ± 0,8 versus 0,8 ± 0,8) quando os espermatozoides foram colhidos a partir de epidídimos processados imediatamente após o abate quando comparados aos mantidos 12 horas sob refrigeração, respectivamente. Conclui-se que 12 horas de refrigeração do epidídimo após o abate, prejudica a qualidade das células espermáticas, impossibilitando a congelação do sêmen.Palavras-chave: bovino, cauda-epidídimo, célula-espermática, congelação. AbstractThe purpose of this study was to evaluate effect of epididymis cooling on bovine frozen sperm viability. Ten pairs of testes/epididymes were collected of a commercial slaughterhouse; one epididymis from each pair was refrigerated at 4ºC for 12 hours and the other immediately proceeded. Epididymis was isolated, sperm cells collected after epididymal slicing and then analyzed regarding to motility, vigor, total number of sperm, morphology and membrane integrity. Sperm cells were frozen in Botubov® extender (Botupharma Biotecnologia Animal, Botucatu, SP, Brazil) and thawed for semen analysis. The same procedure was performed with cooled testis/epididymis. Results demonstrated higher viability (p≤0,05) of fresh cells to the total number of spermatozoa (1,9 ± 1,2 versus 0,9 ± 0,9 x 10 9 spermatozoa), sperm motility (74,0 ± 15,1 versus 20,5 ± 13,8%) and vigor (3,7 ± 0,5 versus 1,7 ± 0,8), and for pos-thawing motility (23,5 ± 16,7 versus 8,0 ± 7,9%) and vigor (2,0 ± 0,8 versus 0,8 ± 0,8) when spermatozoa were collected immediately post-slaughter than maintained cooling 12 hours, respectively. We conclude that 12 hours of epididymis cooling after slaughter decreases sperm cells quality.

DNA extraction methods of canine sperm cells to sexing by quantitative PCR

“…Usually, for DNA extraction from other cells such as blood samples, a volume of 200 μL to 1 mL or a total number of cells greater than or equal to 1x108 cells are used (GE manual, 2007). However, unlike other animal species such as bovine (Scott et al, 2016;Scott et al, 2018), dog's ejaculate volume and sperm concentration are low, requiring technique improvement that allows DNA extraction from smaller volumes and subsequent qPCR.…”