Variability and interactions between endophytic bacteria and fungi isolated from leaf tissues of citrus rootstocks

Abstract

Fungi and bacteria were isolated from surface disinfected leaf tissues of several citrus rootstocks. The principal bacterial species isolated were Alcaligenes sp., Bacillus spp. (including B. cereus, B. lentus, B. megaterium, B. pumilus, and B. subtilis), Burkholderia cepacia, Curtobacterium flaccumfaciens, Enterobacter cloacae, Methylobacterium extorquens, and Pantoea agglomerans, with P. agglomerans and B. pumilus being the most frequently isolated species. The most abundant fungal species were Colletotrichum gloeosporioides, Guignardia citricarpa, and Cladosporium sp. Genetic variability between 36 endophytic bacterial isolates was analysed by the random amplified polymorphic DNA (RAPD) technique, which indicated that B. pumilus isolates were more diverse than P. agglomerans isolates, although genetic diversity was not related to the host plants. In vitro interaction studies between G. citricarpa isolates and the most frequently isolated endophytic bacteria showed that metabolites secreted by G. citricarpa have an inhibitory growth effect on some Bacillus species, and a stimulatory growth effect on P. agglomerans.

Caracterização da comunidade bacteriana endofítica de citros por isolamento, PCR específico e DGGE

“…A comunidade endofítica de citros foi caracterizada com base em diferentes técnicas. A técnica de isolamento revelou os principais endófitos culturáveis de citros, como anteriormente realizado por Araújo et al (2001) e Andreote et al (2004), que observaram alterações na comunidade natural de plântulas de citros depois da inoculação de endófitos geneticamente modificados. Conforme descrito para batata (Garbeva et al, 2001) e citros (Araújo et al, 2002), a técnica de DGGE permite a caracterização da comunidade bacteriana endofítica cultivável e não cultivável, mostrando espéci-es bacterianas não observadas pela técnica de isolamento.…”

“…Os ramos foram lavados em água corrente e desinfectados por meio de imersões sucessivas em etanol 70% por um minuto, solução de hipoclorito de sódio 2% por cinco minutos, etanol 70% por 30 segundos e dois enxágües em água destilada (Araújo et al, 2001). Alíquotas da água utilizada no enxágüe foram semeadas sobre meio TSA (Trypic Soy Agar) 5% para avaliar a eficiência da desinfecção superficial.…”

“…O isolamento foi realizado por meio do pressionamento de fragmentos das plantas sobre o meio não seletivo TSA 5% (Araújo et al, 2001) e sobre o meio específico para bactérias metilotróficas Choi (Toyama et al, 1998), suplementados com benomil (50 µg mL -1 ) para inibição do crescimento fúngico. Em seguida, as placas foram incubadas a 28°C por até 30 dias, quando foi observado o crescimento das colônias.…”

“…Com o acúmulo de informações sobre a interação planta-endófitos (Azevedo et al, 2000;Araújo et al, 2001), e com a determinação das diferentes funções desses microrganismos no interior da planta, tem sido dada atenção ao estudo de bactérias endofíticas, que podem atuar no controle biológico de inúmeras doenças (Hallmann et al, 1997;M'Piga et al, 1997), na promoção de crescimento vegetal (Hallmann et al, 1997;Bent & Chanway, 1998), e na biorremediação de áreas poluídas (Newman & Reynolds, 2005).…”

Biodiversity Measures in Agriculture Using DNA

“…In soil the various microorganisms frequently starve, and are nurtured and attracted by root exudates. Microorganisms may be symbionts, in an intimate association where important new morphological structures are created, at least at the cellular level; or promote plant growth by, for example, producing beneficial substances or being antagonistic to pathogens (Araújo et al, 2001;Silveira & Freitas, 2007;Torres et al, 2009). Microorganisms may be pathogens, and plants have to defend themselves.…”