A Leishmaniose Visceral é uma doença negligenciada que acomete populações em países de clima tropical e subtropical. O Brasil encontra-se entre os seis países com maior registro de novos casos no mundo. Os cães têm importante papel no ciclo de transmissão da leishmaniose, atuando como reservatório dos parasitos, uma vez que são suscetíveis à infecção e convivem próximos aos seres humanos. Apesar de existir um medicamento para tratamento da Leishmaniose Visceral Canina (LVC), o Programa de Controle da Leishmaniose Visceral (PCLV) do Ministério da Saúde, determina como uma das estratégias para controle e erradicação da doença o controle do reservatório canino através de inquérito sorológico seguido à eutanásia de cães sororreagentes. O inquérito sorológico tem se mostrado uma estratégia falha, no que se refere a eutanásia em cães sororreagentes e ao uso do TR DPP® LVC preconizado pelo MS para o diagnóstico da LVC. Dessa forma ainda é necessário o desenvolvimento de novos imunoensaios cromatográficos rápidos (LFIA) com melhor performance para evitar diagnóstico impreciso dos cães e melhorar o programa de controle da LVC. O antígeno alvo deste trabalho foi previamente caracterizado como bom antígeno recombinante para ensaio diagnóstico indireto de LVC por ELISA. Neste trabalho este antígeno foi otimizado in sílico, produzido de forma recombinante. Foram realizados testes com propósito produzir, estabilizar e avaliar a funcionalidade da proteína como antígeno no diagnóstico indireto por imunocromatografia. Nos testes de adsorção, o antígeno purificado foi capaz de formar ligações estáveis ao ouro coloidal e em testes preliminares de ensaio ELISA e tiras LFIA a proteína otimizada se mostrou um antígeno funcional, pois anticorpos específicos presente em amostra de soro de cão positiva para LVC, reconheceram e reagiram com a rLicNTPDase2-Gold. Palavras-chave: Leishmaniose visceral canina. Ensaio diagnóstico indireto. LFIA. Antígeno recombinante otimizado.