Triagem funcional de genes envolvidos no processo de manutenção da inativação do cromossomo X em humanos

Análise da função de genes candidatos à manutenção da inativação do cromossomo X em humanos.

“…No nosso laboratório, foi feita uma triagem funcional para poder identificar prováveis genes necessários para a manutenção do estado de inativação do cromossomo X (Vergani, 2014). Dessa maneira, foram utilizados como modelo celular fibroblastos dérmicos humanos 46, XX heterozigotos para uma mutação de perda de função no gene HPRT1, pois tem sido muito utilizados na literatura como ferramenta de detecção da reativação do cromossomo X (Mekhoubad et al, 2012).…”

“…O sistema de siRNAs é uma ferramenta valiosa para a identificação de reguladores genéticos em processos biológicos (Vergani, 2014). Contudo, múltiplos fatores exercem influência sob cada um dos passos experimentais adotados, podendo assim, afetar a qualidade e a significância biológica dos resultados obtidos (Sims et al, 2011;Strezoska et al, 2012, Zhang et al, 2004Sack et al, 2016).…”

“…As curvas de crescimento geradas previamente no nosso laboratório para a linhagem GM1661 demostraram que o uso de HAT é eficiente para seleção de fibroblastos primários HPRT+, porém, não é possível ver uma depleção completa dessas células na placa de cultura ao finalizar o tratamento ( Vergani, 2014) A análise dos efeitos do knockdown de H3F3B a nível transducional através de ensaios de western blot não foi possível. H3.3 é uma proteína de localização nuclear que apresenta um papel importante no empacotamento de DNA (Szenker et al, 2011), assim o uso de um normalizador nuclear seria necessário para avaliar sua expressão.…”