Toll-like receptor profiling of seven trophoblast cell lines warrants caution for translation to primary trophoblasts

Gierman, Lobke; Stødle, Guro; Tangerås, Line Haugstad; Austdal, Marie; Olsen, Gunn-Hege; Follestad, Turid; Skei, Bente; Rian, Kristin; Gundersen, Astrid; Austgulen, Rigmor; Iversen, Ann‐Charlotte

doi:10.1016/j.placenta.2015.09.004

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“…This cell line depicted the invasive properties of trophoblastic cells evident during the first trimester of pregnancy. The second cell line employed was the human choriocarcinoma BeWo cell line that depicts syncytial properties with barrier function characteristically seen during the second and third trimesters of pregnancy [28]. BeWo cells were cultured and maintained under similar conditions as the HTR8 cell line.…”

Section: Methodsmentioning

confidence: 99%

Differential microRNA expression in human placentas of term intra-uterine growth restriction that regulates target genes mediating angiogenesis and amino acid transport

et al. 2017

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Placental insufficiency leading to intrauterine growth restriction (IUGR) demonstrates perturbed gene expression affecting placental angiogenesis and nutrient transfer from mother to fetus. To understand the post-transcriptional mechanisms underlying such placental gene expression changes, our objective was to identify key non-coding microRNAs that express biological function. To this end, we initially undertook microarrays targeting microRNAs in a small sub-set of placentas of appropriate (AGA) versus small for gestational age (SGA) weight infants, and observed up-regulation of 97 miRs and down-regulation of 44 miRs in SGA versus AGA. In a larger cohort of samples (AGA, n = 21; SGA, n = 11; IUGR subset, n = 5), we validated by qRT-PCR differential expression of three specific microRNAs (miR-10b, -363 and -149) that target genes mediating angiogenesis and nutrient transfer. Validation yielded an increase in miR-10b and -363 expression of ~2.5-fold (p<0.02 each) in SGA versus AGA, and of ~3-fold (p<0.005) in IUGR versus AGA, with no significant change despite a trending increase in miR-149. To further establish a cause-and-effect paradigm, employing human HTR8 trophoblast cells, we assessed the effect of nutrient deprivation on miR expression and inhibition of endogenous miRs on target gene expression. In-vitro nutrient deprivation (~50%) increased the expression of miR-10b and miR-149 by 1.5-fold (p<0.02) while decreasing miR-363 (p<0.0001). Inhibition of endogenous miRs employing antisense sequences against miR-10b, -363 and -149 revealed an increase respectively in the expression of the target genes KLF-4 (transcription factor which regulates angiogenesis), SNAT1 and 2 (sodium coupled neutral amino acid transporters) and LAT2 (leucine amino acid transporter), which translated into a similar change in the corresponding proteins. Finally to establish functional significance we performed dual-luciferase reporter assays with 3’-insertion of miR-10b alone and observed a ~10% reduction in the 5’-luciferase activity versus the control. Lastly, we further validated by microarray and employing MirWalk software that the pathways and target genes identified by differentially expressed miRs in SGA/IUGR compared to AGA are consistent in a larger cohort. We have established the biological significance of various miRs that target common transcripts mediating pathways of importance, which are perturbed in the human IUGR placenta.

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Section: Methodsmentioning

confidence: 99%

Differential microRNA expression in human placentas of term intra-uterine growth restriction that regulates target genes mediating angiogenesis and amino acid transport

et al. 2017

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“…E, interessantemente, receptores do tipo Toll estão presentes durante toda a gestação na interface materno-fetal. TLR4 foi encontrado no citoplasma do sinciciotrofoblasto, também sendo expresso em células do citotrofoblasto do primeiro trimestre] (WUJICKA et al, 2014;GIERMAN et al, 2015).…”

Section: Resposta Imune a T Gondii: Participação Ativa De Toll Like unclassified

“…O motivo pelo qual isso acontece ainda não está bem estabelecido. É possível que diferenças na expressão de TLRs e/ou produção de citocinas e demais mediadores inflamatórios possam estar envolvidos nestes mecanismos (GIERMAN et al, 2015).…”

unclassified

“…Estudos demonstram que a linhagem de células BeWo expressa nove dos dez RNAm de TLR, enquanto que JEG-3 expressa oito dos dez tipos de TLRs. Em adição, células HTR-8 expressam os receptores Toll do tipo TLR 1, TLR3, TLR4 e TLR5 (EQUILS et al, 2006;GIERMAN et al, 2015). Assim, visto que as células trofoblásticas expressam quase todos os dez tipos de TLRs, podemos considerar estas…”

unclassified

“…Estudos corroboram com nossa hipótese, pois foi relatado que linhagens celulares que são transfectadas com o vírus SV40, como a HTR-8/SVneo, são mais restritas na expressão de TLRs quando comparado às linhagens de trofoblasto derivadas de coriocarcinoma. Em adição, o mesmo estudo relatou que LPS não estimula uma resposta eficiente na modulação de citocinas nesse tipo celular HTR-8/SVneo(GIERMAN et al, 2015). Considerando os dados de proliferação de T. gondii materno-fetal e verificamos redução da infecção.…”

unclassified

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Avaliação funcional de Toll-Like Receptor 4 (TLR4) em células trofoblásticas humanas vilosa/extravilosa e em vilos placentários humanos de terceiro trimestre gestacional infectados por Toxoplasma gondii

Rosini¹

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Avaliação funcional de Toll-Like Receptor 4 (TLR4) em células trofoblásticas humanas vilosa/extravilosa e em vilos placentários humanos de terceiro trimestre gestacional infectados por Toxoplasma gondii ALESSANDRA MONTEIRO ROSINI Uberlândia 2019 UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLÂNDIA Instituto de Ciências Biomédicas Programa de Pós-Graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas Avaliação funcional de Toll-Like Receptor 4 (TLR4) em células trofoblásticas humanas vilosa/extravilosa e em vilos placentários humanos de terceiro trimestre gestacional infectados por Toxoplasma gondii Dissertação apresentada ao Colegiado do Programa de Pós-Graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas como requisito parcial a obtenção do título de Mestre. ALESSANDRA MONTEIRO ROSINI Uberlândia 2019 DEDICATÓRIA: A minha amada mãe Elizabeth Monteiro Rosini, dedico este trabalho. Saiba que a senhora foi essencial para o meu crescimento profissional, e foi peça fundamental da minha formação, sem você eu nada seria. Dedico também ao meu amado pai Fred Jorge Rosini e minha querida irmã Andressa Monteiro Rosini, pelo apoio, carinho e compreensão. Ao meu querido Frederico, por todo carinho. Amo Vocês ! AGRADECIMENTOS: Em primeiro lugar agradeço a Deus, por me conceder o dom da vida, por me abençoar em cada momento, e por me guardar diante de seus braços. Meus sinceros agradecimentos a minha orientadora Prof Dra Bellisa de Freitas Barbosa, por me receber de braços abertos, por confiar e acreditar em mim. Gostaria de deixar registrado o quanto a admiro, e o quanto você foi essencial para o início de minha formação profissional. À querida Prof Dra Eloisa Amália Vieira Ferro, por ter me acolhido em seu laboratório, pelo carinho e confiança. À Iliana e Rafaela agradeço pelo imenso apoio na execução do meu trabalho, obrigada pelos ensinamentos, pela paciência e pela compreensão. Aos queridos Guilherme, Marina e Luana, agradeço imensamente o carinho e ajuda constante. Aos amigos de trabalho, Priscila, Thádia, Maria Tereza, Mayara, Pâmela, agradeço a companhia, as conversas jogadas fora, os ensinamentos e o apoio. Ao amigo de longa data Alessandro e aos que fiz no Laboratório de Alergia e Imunologia Clínica: Laura, Karine, Hellen e Vinícius, meus singelos agradecimentos, vocês são parte essencial da minha jornada. Aos amigos da graduação, Ciro, Júlia, Larissa, Maísa, Matheus, por todo carinho ao longo dos anos. Aos amigos de minha cidade natal, meus sinceros agradecimentos.A minha família; razão de ser quem sou, muito obrigada.As agências de fomento, pelo apoio financeiro. LISTA DE ABREVIAÇÕES CPRG-Chlorophenol Red-β-D-galactopyranoside DNAs MIF-Fator Inibitório de Migração dos Macrófagos MYDD88-Fator 88 de Diferenciação Mielóide NF-ҡb-Fator Nuclear kappa b NK-Natural Killer PAMPs-Padrões Moleculares Associados a Patógenos PBS-Tampão Fosfato Salino PCR-Reação em Cadeia Polimerase PETN-MG-Programa Estadual de Triagem Neonatal PLAP-Fosfatase Alcalina Placentária PRR-Receptores de Reconhecimento Padrão RNAs-Ácido Ribonucleico ROMs-Proteases Romboides ROP...

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Zika, dengue and yellow fever viruses induce differential anti-viral immune responses in human monocytic and first trimester trophoblast cells

et al. 2018

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Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne flavivirus associated with severe neonatal birth defects, but the causative mechanism is incompletely understood. ZIKV shares sequence homology and early clinical manifestations with yellow fever virus (YFV) and dengue virus (DENV) and are all transmitted in urban cycles by the same species of mosquitoes. However, YFV and DENV have been rarely reported to cause congenital diseases. Here, we compared infection with a contemporary ZIKV strain (FSS13025) to YFV17D and DENV-4 in human monocytic cells (THP-1) and first-trimester trophoblasts (HTR-8). Our results suggest that all three viruses have similar tropisms for both cells. Nevertheless, ZIKV induced strong type 1 IFN and inflammatory cytokine and chemokine production in monocytes and peripheral blood mononuclear cells. Furthermore, ZIKV infection in trophoblasts induced lower IFN and higher inflammatory immune responses. Placental inflammation is known to contribute to the risk of brain damage in preterm newborns. Inhibition of toll-like receptor (TLR)3 and TLR8 each abrogated the inflammatory cytokine responses in ZIKV-infected trophoblasts. Our findings identify a potential link between maternal immune activation and ZIKV-induced congenital diseases, and a potential therapeutic strategy that targets TLR-mediated inflammatory responses in the placenta.

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Toll-like receptor profiling of seven trophoblast cell lines warrants caution for translation to primary trophoblasts

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Differential microRNA expression in human placentas of term intra-uterine growth restriction that regulates target genes mediating angiogenesis and amino acid transport

Differential microRNA expression in human placentas of term intra-uterine growth restriction that regulates target genes mediating angiogenesis and amino acid transport

Avaliação funcional de Toll-Like Receptor 4 (TLR4) em células trofoblásticas humanas vilosa/extravilosa e em vilos placentários humanos de terceiro trimestre gestacional infectados por Toxoplasma gondii

Zika, dengue and yellow fever viruses induce differential anti-viral immune responses in human monocytic and first trimester trophoblast cells

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