The unusual high molecular mass of Bothrops protease A, a trypsin-like serine peptidase from the venom of Bothrops jararaca, is due to its high carbohydrate content

Murayama, Nobuhiro; Saguchi, Ken-ichi; Mentele, Reinhard; Assakura, Marina T.; Ohi, Hiroshi; Fujita, Yoshiaki; Camargo, Antônio Carlos Martins de; Higuchi, Shigesada; Serrano, Solange M.T.

doi:10.1016/j.bbapap.2003.08.001

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“…The glycosylation of the heavy chain probably endows EfP-b with great stability and a high level of resistance to proteolysis [41]. A similar effect has also been demonstrated in Bothrops protease A, glycosylation of which has a stabilizing effect on the protein conformation [38]. (2) The oligosaccharides affect the regulation of protease function, for instance the Agkistrodon actus serine proteinases-I and -II whose N-linked oligosaccharides collide spatially with some inhibitors and hinder their inhibitory binding [37].…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 77%

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Glycosylated trypsin-like proteases from earthworm Eisenia fetida

Zhao

Pan

et al. 2007

International Journal of Biological Macromolecules

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Section: Discussionmentioning

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“…Recently, several glycosylated serine proteases have been isolated from different species, such as lobster [36], Agkistrodon acutus [37], Bothrops jararaca [38] and gila [39]. The bound carbohydrates have some important effects on the structure and function of proteases: (1) Glycosylation stabilizes the spatial structure of a protease.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Glycosylated trypsin-like proteases from earthworm Eisenia fetida

Zhao

Pan

et al. 2007

International Journal of Biological Macromolecules

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“…The inspection of the sequences of identified peptides (a total of 331 peptides of which 213 were unique peptides; supplemental Table 3), revealed that some of the peptides were likely cleaved off from proteins at cleavage sites that are compatible with SVMP and SVSP proteolytic specificities (supplemental Table 4) (14,45,(73)(74)(75)(76)(77)(78)(79)(80)(81)(82)(83)(84)(85)(86)(87). Based on the results of 662 cleavage sites, there is observed preference across the P4-P4Ј sites for Tyr, Ser, Pro, and Arg at P1 and for Ala, Gln, Gly, and Val at P1Ј, in decreasing order of frequencies (Fig.…”

Section: De Novo Sequencing Of Peptides Present In the Venomsmentioning

confidence: 99%

Peptidomics of Three Bothrops Snake Venoms: Insights Into the Molecular Diversification of Proteomes and Peptidomes

Tashima

Zelanis

Kitano

et al. 2012

Molecular & Cellular Proteomics

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Snake venom proteomes/peptidomes are highly complex and maintenance of their integrity within the gland lumen is crucial for the expression of toxin activities. There has been considerable progress in the field of venom proteomics, however, peptidomics does not progress as fast, because of the lack of comprehensive venom sequence databases for analysis of MS data. Therefore, in many cases venom peptides have to be sequenced manually by MS/MS analysis or Edman degradation. This is critical for rare snake species, as is the case of Bothrops cotiara (BC) and B. fonsecai (BF), which are regarded as near threatened with extinction. In this study we conducted a comprehensive analysis of the venom peptidomes of BC, BF, and B. jararaca (BJ) using a combination of solid-phase extraction and reversed-phase HPLC to fractionate the peptides, followed by nano-liquid chromatography-tandem MS (LC-MS/MS) or direct infusion electrospray ionization-(ESI)-MS/MS or MALDI-MS/MS analyses. We detected marked differences in the venom peptidomes and identified peptides ranging from 7 to 39 residues in length by de novo sequencing. Forty-four unique sequences were manually identified, out of which 30 are new peptides, including 17 bradykinin-potentiating peptides, three poly-histidine-poly-glycine peptides and interestingly, 10 L-amino acid oxidase fragments. Some of the new bradykinin-potentiating peptides display significant bradykinin potentiating activity. Automated database search revealed fragments from several toxins in the peptidomes, mainly from L-amino acid oxidase, and allowed the determination of the peptide bond specificity of proteinases and amino acid occurrences for the P4-P4 sites. We also demonstrate that the venom lyophilization/resolubilization process greatly increases the complexity of the peptidome because of the imbalance caused to the venom proteome and the consequent activity of proteinases on venom components. The use of proteinase inhibitors clearly showed different outcomes in the peptidome characterization and suggested that degradomic-peptidomic analysis of snake venoms is highly sensitive to the conditions of sampling procedures. Molecular & Cellular Proteomics 11: 10.1074/mcp.M112.019331, 1245-1262, 2012.Snake venoms are the products of specialized secretory glands located above the upper jawbone in venomous snakes. Like most secretory proteins, venom toxins are synthesized in the cytoplasm of secretory cells in the gland and transferred to the rough endoplasmic reticulum, then to the Golgi apparatus, and finally transported via secretory granules to the lumen of the venom gland (1). The snake venomous secretion is an aqueous solution containing a high amount of proteins and peptides, however the mechanisms for controlling protein secretion into the gland lumen and for regulating its protein/peptide concentration, ionic strength, and pH are unknown. As in all eukaryotic cells the proteomes of the venom gland tissue are highly complex, comprising a much great number and diversity of multidomain proteins (2...

show abstract

“…Considerando a existência de diversos componentes N-glicosilados no veneno de serpentes do gênero Bothrops (Lochnit e Geyer, 1995;Murayama et al, 2003;Silva-Junior et al, 2007;Serrano et al, 1998;Silva et al, 2004;Yamashiro et al, 2014) jararaca mostrou a presença de alguns unigenes associados a vias de glicosilação, e a análise de enriquecimento de genes indicou a importância de genes associados à glicosilação para a biossíntese de veneno (Junqueira-de-Azevedo et al, 2015).…”

Section: Glicosilação De Toxinasunclassified

“…A N-glicosilação é uma modificação pós-traducional descrita em muitas proteínas de venenos de serpentes (Lochnit e Geyer, 1995;Murayama et al, 2003;Silva-Junior et al, 2007;Serrano et al, 1998;Silva et al, 2004;Yamashiro et al, 2014), e dessa forma a mudança no perfil eletroforético das proteínas do veneno submetidas à N-desglicosilação era esperada. Já a análise da O-desglicosilação dos venenos foi afetada pelo tratamento com a neuraminidase, necessário para propiciar o acesso das enzimas para remoção dos O-glicanos.…”

Section: Glicosilação De Toxinas De Venenos Do Grupo Jararacaunclassified

Abordagens experimentais em proteômica e glicômica aplicadas à caracterização do veneno de <i>Bothrops alcatraz</i>

Andrade-Silva¹

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A Deus, pela vida e pelas oportunidades.Aos meus pais, Maria Rita e Osvaldo, que sempre fizeram de tudo por mim. Obrigada por todo apoio (em todos os sentidos), incentivo e amor. Vocês são a melhor referência que uma pessoa poderia ter, meus amores, minha força. Sem vocês eu jamais teria conseguido seguir o caminho que eu escolhi. Eu amo muito vocês! Tenho muito orgulho de ser filha de vocês! Ao amor da minha vida, Marcelo. Minha vida, você é o homem, ser humano e cientista mais espetacular do Universo. Minha admiração por você é imensa. Poder caminhar ao seu lado é o maior privilégio que existe. Você me inspira, me dá forças e faz de mim uma pessoa muito melhor. Amo você cada dia mais e mais! Meu One Piece, Koishiteru ♥.À Dona Rai! Sempre tão fofa e amorosa! Saiba que é amada e muito querida por mim! Aos meus anjinhos de 4 patas (em ordem alfabética) Dengo, Denguinha, Docinho, Lindinha (e seus filhotinhos), Mini, Nina, Pandorinha e Solzinha. Obrigada por todo carinho, ternura e por sempre me recordar que o melhor presente que podemos dar a quem amamos é o nosso tempo e companhia. À Dra. Solange Maria de Toledo Serrano, pela orientação, pelos ensinamentos, amizade, paciência e grande generosidade. Muito obrigada por compartilhar seu conhecimento e me ajudar a amadurecer.Aos colaboradores deste projeto Dr. André Zelanis e Dra. Aline Soriano Lopes. Muito obrigada pelas ideias, pelos ensinamentos, discussões, inúmeras contribuições e amizade. À Dra. Milene Menezes dos Santos, pela amizade, pelas discussões, pelos ensinamentos, generosidade e auxílio.Ao Eduardo Shigueo Kitano, muito obrigada por sua generosidade, sempre disponível para discutir e ajudar no trabalho. Agradeço também por toda ajuda na análise dos dados e na elaboração dos experimentos. À Dra. Ana Karina de Oliveira, Dra. Ana Helena Pagotto, Dr. Leo Iwai, Dr. Eric Green, Ms. Luciana Nasciben, Dyoni Matias, Daniele Henrique e Carolina Brás. Obrigada pelas amizades, conversas e convívio. Vocês fazem do nosso laboratório um lugar muito mais alegre e enriquecedor.À Pollyanna Fernandes, pela ajuda na formatação da dissertação.Ao Prof. Dr. Vernon Reinhold, por ter me recebido tão bem em seu laboratório e por ter me mostrado o quão maravilhoso e complexo é o mundo dos hidratos de carbono.Ao Dr. David Ashline por partilhar um pouquinho da sua imensa sabedoria a respeito da fragmentação de glicanos e análise por espectrometria de massas.Ao Dr Hailong Zang, por me ajudar a me estabelecer em Durham e pelas valiosas dicas sobre análise de glicosiltransferases. À Dra. Thuy Tran, pela sua amizade e generosidade em me ensinar a prática laboratorial dos N-glicanos. Conhecer-te aqueceu meu coração.Ao Prof. Dr. Hugo Armelin, coordenador do Center of Toxins, Immune-response and Cell Signaling-CEPID-FAPESP, pelo apoio para o desenvolvimento deste trabalho.Ao Dr. Alexandre Tashima pela ajuda na análise do Peptidoma. The Bothrops genus is largely distributed on the Brazilian territory, and B. jararaca is the species of most medical importance in the Southeastern region. Ge...

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The unusual high molecular mass of Bothrops protease A, a trypsin-like serine peptidase from the venom of Bothrops jararaca, is due to its high carbohydrate content

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Glycosylated trypsin-like proteases from earthworm Eisenia fetida

Glycosylated trypsin-like proteases from earthworm Eisenia fetida

Peptidomics of Three Bothrops Snake Venoms: Insights Into the Molecular Diversification of Proteomes and Peptidomes

Abordagens experimentais em proteômica e glicômica aplicadas à caracterização do veneno de <i>Bothrops alcatraz</i>

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