A ocorrência de doenças veiculadas por alimentos é cada vez mais frequente, atingindo um número crescente de indivíduos. Os surtos ocasionados por Listeria monocytogenes têm sido associados a uma ampla gama de produtos alimentícios incluindo derivados lácteos. Muitas especialidades regionais de queijo são fabricadas a partir de leite cru nas propriedades rurais, empregando barreiras tecnológicas numa base empírica, podendo representar risco à segurança do consumidor se patógenos estiverem presentes. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de Listeria spp. e L. monocytogenes isoladas de amostras de queijo artesanal coletados no município de Seara, Estado de Santa Catarina, Brasil. Foram analisadas 8 amostras de queijo artesanal, sendo realizadas as etapas de enriquecimento primário e secundário, seguidas do plaqueamento em meios de cultura seletivos. As colônias suspeitas de Listeria spp. ou L. monocytogenes foram testadas quanto às características fenotípicas de crescimento em Agar Listeria segundo Ottaviani e Agosti, hemólise, utilização de carboidratos, reação da catalase, coloração de Gram, teste VM-VP, redução de nitrito e motilidade. Nenhuma amostra apresentou presença do patógeno L. monocytogenes, mas houve presença do gênero Listeria spp. em quatro amostras de queijo artesanal, fazendo-se necessário o contínuo monitoramento do rebanho e da qualidade microbiológica do alimento.