The involvement of autophagy in melanoma vasculogenic mimicry

Abstract

Introduction. Autophagy, a catabolic process of protein and organelle recycling by transferring defective cytoplasm and organelles into double-membraned vesicles to degrade and regenerate materials, plays a critical role in maintaining energy homeostasis. Autophagy also protects against stress and infection, participates at the development of autoimmune disease. In recent years, the existence of alternative blood circulation system in tumors, vasculogenic mimicry (VM), which can partially compensate the lack of nutrients and oxygen under the hypoxic conditions, has been described. Objective. To elucidate the relationship between autophagy and VM. Materials and methods. In this study we used 2D- and 3D-culturing of melanoma cells derived from surgical species of patients with disseminated melanoma, electrophoresis and western blot, knockdown of the genes by using small interfering RNA (siRNA), flow cytometry, fluorescence microscopy. Results. We detected the basal level autophagy by examining the expression of autophagy-specific protein (LC-3B) by flow cytometry and cellular immunofluorescence staining by monodancylcadaverine. Both assays are the markers of autophagy late stage. Here we show that the level of autophagy in melanoma cells mel P, participated in capillary-like structures (CLS) formation in matrigel, was considerably higher than in mel Me cells which do not involve in VM. To explore the function of autophagy in the ability of melanoma cells to form CLS 3-methyladenine (3-MA) or chloroquine - inhibitors of initiation and terminal stage of autophagy - were used. Both inhibitors reduced the ability of melanoma cells to engage in VM. The data obtained were confirmed by siRNA-mediated gene silencing of BECN1 involved in the initiation of autophagy and ATG5 gene which is considered to be a marker of late stage of autophagy. Knockdown of BECN1 or ATG5 in mel P melanoma cells reduced the level of protein Beclin-1 and Atg5 about 70-75 %, and suppressed CLS formation in matrigel. Melanoma cells with the ATG5 gene knockdown changed the shape but maintained the ability to migrate and recognize each other, the formation of CLS was not observed. Low molecular weight VM inhibitor LCS-1269, significantly reduced the basic level of autophagy. Conclusion. Our data indicate that autophagy participates in CLS formation, and inhibition of autophagy suppresses CLS formation. We suggest that autophagy plays a dual role in the survival and development of tumors: autophagy helps cancer cells against environment stress and provides a temporary survival pathway by promoting energy regeneration, autophagy also promotes VM formation which supplies nutrients and oxygen to less vascularized area of tumor.

Crosstalk between autophagy and iron in melanoma progression

“…Избирательное аккумулирование MDC в аутофагосомах посредст-вом специфического взаимодействия с липидами мембран аутофагосом свидетельствует о переходе аутофагии в необратимую фазу. Ранее нами было показано, что экспрессия LC-3B в клетках меланомы, определенная методом иммунофлуоресценции на проточном цитофлуориметре, строго коррелирует с флуоресценцией MDC [5]. И потому в этом исследовании за базовым уровнем аутофагии мы следили по флуоресценции MDC.…”

“…Базовый уровень аутофагии в клеточных линиях mel P и mel Z с высокой экспрессией СD71 (50 ± 3 и 64 ± 3 % соответственно) был значительно выше, чем в клеточных линиях mel Gus и mel Ibr с низкой экспрессией CD71 (2,8 ± 0,05 и 5,3 ± 1 % соответственно). Поскольку высокозлокачественный фенотип коррелирует с высоким уровнем аутофагии в клетках меланомы [5], полученные нами результаты позволяют предположить, что ионы железа вовлекаются в процессы, поддерживающие агрессивность клеток меланомы. Подтвердить это нам удалось исследованием вклада донора и хелатора железа в базовый уровень аутофагии.…”

“…На поздних стадиях заболевания, при гипоксии, лучевой терапии или действии цитотоксических противоопухолевых препаратов аутофагия используется опухолевой клеткой как механизм выживания и может стать причиной лекарственной устойчивости и быстрой прогрессии опухоли [4]. Результаты, полученные в нашей лаборатории, позволили идентифицировать ранее не описанную в литературе функцию аутофагии -участие в сигнальных путях, вовлекающихся в формирование сети васкулярных каналов опухолевыми клетками, васкулогенной мимикрии (ВМ), которая может частично компенсировать недостаточно быстрое развитие в опухоли кровеносной микроциркуляторной сети [5][6][7].…”