Técnica inmunocitoquímica para evaluar la proliferación de células en cultivo por la incorporación de romodeoxiuridina

Abstract

Para evaluar la proliferacion fn vitro de células, se estandarizó una técnica inmunocitoquimica no radioactiva. fácil de manejar, más rápida y segura que permite detectar la bromodeoxiuridina (BrdU) incorporada en las células que entran en fase S. Durante la estandarización de la técnica inmunocitoquimica con peroxidasa, se usaron varios tipos celulares y se obtuvieron resultados similares. Brevemente, se realiza una incubación con BrdU durante 48 horas y luego, se procesa el material celular para una inmunocitoquimica convencional que tiene como paso adicional la desnaturalización del ADN con HCI previa a la incubación con el anticuerpo primario anti-BrdU. Como cromógeno se usó la DAB (diaminobenzidina) o el AEC (aminoetilcarbazol). El procedimiento utilizado permite ver una tinción especifica para núcleos en células que entran en fase S y permite evaluar rápidamente el porcentaje de células que están proliferando en el cultivo.Palabras clave: inmunocitoquímica, bromodeoxiuridina, cultivo celular, células de Schwann. proliferación celular. Description of an irnmunocytochemical evaluation technique for in vitro cell proliferation by bromodeoxiuridine incorporationIn order to evaluate in vitro cell proliferation, an inmunocytochemistry non radioactive, easy, safe and fast technique, which detects bromodeoxiuridine taken by entering in S phase cells, was standardized. Several kinds of cells were used for peroxidase-inmunocytochemistry technique standardization. In al1 cases the same results were obtained. Briefly, BrdU was incubated for 48 hours. then cell cultures were processed for standard inmunocyiochemistry. An additional step for DNA denaturalization using HCI. before antibody incubation, was included. DA6 (di-amino-benzidine) or AEC (amino-ethyl-carbazol) were used As chromogens. This procedure results in a specific nuclei staining on proliferating cells and it allows quick evaluation of cell proliferation on cultures.Key words: inmunocyitochemistry. bromodeoxiuridine, cell culture. Schwann cells, cellular proliferation.La mayoría de las técnicas utilizadas hasta hace incorporación de bromodeoxiuridina (BrdU) y su poco tiempo para determinar la proliferación detección por inmunocitoquimica es una de ellas celular, emplean sustancias radioactivas de y permite realizar un seguimiento de la proliferación manejo peligroso que requieren tiempos celular tanto in vivo como in vitro en cultivo (4).prolongados para la evaluación final de los resultados, como es el caso de la incorporación La BrdU se utiliza, básicamente, para determinar de timidina tritiada (1,3).Asi, se han desarrollado el comportamiento del ciclo celular y realizar su técnicas no radioactivas fáciles de utilizar y seguimiento. Para realizar este seguimiento, se con un menor riesgo al ser ejecutadas. La tienen en cuenta tanto las diferentes fases del ciclo celular como son GO, G1, S, G2 y M, y ciertos Correspondencia:hhurtado@hemagogus.ins.go~.coRecibido: 17/01/00; aceptado: 07/04/00 parámetros de la cinética celular como son el tiempo de duplicaci...