Synthese der Peptidbindung am Ribosom: keine freie benachbarte Hydroxygruppe an der terminalen Ribose der Peptidyl‐tRNA erforderlich

Peptide Bond Formation on the Ribosome: The Role of the 2′‐OH Group on the Terminal Adenosine of Peptidyl‐tRNA and of the Length of Nascent Peptide Chain

“…In such cases, only an approximately 10 % increase in the yield of esterase was detected, a result which is also in agreement with our previous investigations. [6] The results confirm our earlier finding that the 2'-OH group on A76 of peptidyl-tRNA is not essential for the peptide bond formation if complete tRNA and full-length mRNA are used. In the experiments presented herein, we show that after the initiation phase of translation, when the nascent polypeptide chain is longer than 10 amino acid residues, the suppression of the UAG nonsense codon by tRNA Ser(CUA) was not affected by the removal of the 2'-OH group from A76.…”

“…This arrangement could explain the different results reported for model experiments with purified components of translation machinery and those from complete translation systems. [3,6] To demonstrate that the effect caused by removal of 2'-OH on A76 of peptidyl-tRNA is dependent on the length of the nascent polypeptide chain, we introduced a RF1-dependent, nonsense UAG codon at the 5'-terminus of mRNA of tRNA Ser(CUA) -2'dA was prepared as previously described [6,8] and double treated with excess periodate to oxidize any remaining tRNA that terminated with ribose. tRNA Ser(CUA) -2'dA was aminoacylated up to 270 pmole/A 260 by seryl-tRNA synthetase from E. coli.…”

Decoding the Logic of the tRNA Regiospecificity of Nonribosomal FemXWv Aminoacyl Transferase

“…[16] Scheme 1. [18] However, this model remains controversial, since engineered suppressor tRNAs containing a 2'-deoxyadenosine [19] or diacylated adenosine [20] residue were used efficiently in in vitro transcription-translation coupled systems. Highlighted zones show reactions catalyzed by the enzymes indicated in blue.…”

Bildung der Peptidbindung im Ribosom: die Rolle der 2′‐OH‐Gruppe des terminalen Adenosins der Peptidyl‐tRNA und der Länge der entstehenden Peptidkette

“…Dies könnte die Unterschiede zwischen den Ergebnissen des Modellexperiments mit aufgereinigten Komponenten der Translationsmaschinerie und denjenigen mit dem kompletten Translationssystem erklären. [3,6] Um zu demonstrieren, dass der durch die Entfernung der 2'OH-Gruppe von A76 der Peptidyl-tRNA verursachte Effekt von der Länge der Peptidkette abhängt, wurde ein RF1-abhängiges Nonsense-Codon UAG am 5'-Ende der Est2-mRNA in der für die N-terminalen Aminosäuren [6] Die hier gezeigten Ergebnisse bestätigen unsere früheren Erkenntnisse, dass die 2'-OH-Gruppe von A76 der PeptidyltRNA nicht essenziell für die Bildung der Peptidbindung ist, wenn komplette tRNA und Volllängen-mRNA verwendet werden. In den hier dargestellten Experimenten zeigen wir, dass nach der Anfangsphase der Translation, wenn die entstehende Polypeptidkette länger als zehn Aminosäuren ist, die Suppression des Nonsense-Codons UAG durch tRNA Ser(CUA) kaum von der Abwesenheit der 2'-OH-Gruppe an A76 beeinflusst wird.…”

“…Im Unterschied dazu stehen Untersuchungen, in denen die vollständige Peptidyl-tRNA-2'dA und Volllängen-mRNA bei In-vitro-Translationsexperimenten genutzt wurden und in denen keine signifikante Inhibition der Peptidbindungsbildung während der Translation eines internen Codons an Position 155 einer 310 Aminosäuren langen Polypeptidkette der Esterase 2 aus Alicyclobacillus acidocaldarius (Est2) durch Entfernen der 2'-OH-Gruppe der Peptidyl-tRNA in der P-Stelle beobachtet wurde. [6] Der Hauptunterschied zwischen der Translation eines internen Codons einer Volllängen-mRNA und einem Modellexperiment mit einer kurzen, synthetischen mRNA liegt in der Besetzung des Peptidausgangskanals der 50S-Untereinheit. Es ist dokumentiert, dass die Länge der entstehenden Peptidkette die Zugänglichkeit des PTC für Antibiotika verändert und den Ausgang von Vernetzungs-Experimenten im PTC beeinflusst.…”