Предложен модифицированный метод выделения PH К из клеток животных е использованием гуанидинийтиоцианата, позволяющий получать высокомолекулярные препараты как из ядра, так и из цитоплазмы. Разработана схема быстрого переноса РНК под действием вакуума из геля агарозы после электрофоретического разделения на сорбирующие мембраны. Гибридизацией с радиоактивными зондовыми ДНК показана эффективность сочетания указанных подходов для анализа размеров и распределения тран-LKpiunoe индивидуальных генов между ядром и цитоплазмой. Введение. В исследованиях экспрессии генома на претрансляционном уровне широко используются методы, характеризующие размеры, количественный и качественный состав молекул РНК. Среди этих методов весьма информативны применяемые по отдельности или в различных сочетаниях электрофорез в гелях и гибридизация нуклеиновых кислот [1, 2]. Необходимым условием такого анализа является целостность используемых в эксперименте молекул ДНК и РНК. Для ДНК эта проблема хорошо изучена, подробно описаны методические приемы, гарантирующие качество результатов [1, 3]. Более сложными являются манипуляции с РНК ввиду меньшей ее устойчивости к нагреванию и РИКазам. Наша работа посвящена совершенствованию методов, щадящих высокомолекулярную РНК на двух важных этапах ее анализа -при выделении из тканей эукариот и переносе на мембраны после электрофореза.Материалы и методы. В основу выделения РНК положен гуанидинийтиоцианатный метод [4]. Все операции проводили на холоду с использованием стерильной посуды. Растворы сахарозы обрабатывали 0,1 %-ным диэтилпирокарбонатом. Исходный метериал -печень белых крыс. Навеску ткани, замороженную жидким азотом, растирали в ступке и гомогенизировали в 10 объемах 2,5 %-ного раствора лимонной кислоты и 0,05 %-ного тритона X-100. Гомогенат фильтровали через 6-8 слоев марли. Фильтрат центрифугировали при 4000 g в течение 5 мин при 4 °С. К супернатанту, содержащему цитоплазматическую фракцию, добавляли 2,2 объема этанола и аммоний ацетат до концентрации 0,2 M и оставляли на 2 ч при -20 °С, после чего центрифугировали 30 мин при 4000 g (4 °С). Осадок, содержащий ядра, очищали от примесей цитоплазмы. Его ресуспендировали в 10 объемах раствора, содержащего 0,25 M сахарозу и 2,5 %-ную лимонную кислоту, с последующим центрифугированием при 4000 g в течение 10 мин при 4 °С. Полученный осадок ресуспендировали в 5 объемах того же буфера, суспензию наслаивали на равный объем раствора 0,88 M сахарозы, 2,5 % лимонной кислоты и центрифугировали при 4000 g в течение 15 мин при 4 °С. Очищенные ядра и осажденную цитоплазматическую фракцию гомогенизировали в лизирующем буфере (4 M гуанидинийтиоцианат («Fluka», Швейцария), 10 мМ ЭДТА, 50 мМ трис-HCl, рН 7,6, 8 %-ный 2-меркаптоэтанол (по объему), 0,5 %-ный саркозил) из расчета 5 мл буфера на 1 г ткани. Гомогенат лизированных ядер пропускали через иглу для инъекций №8 до снижения вязкости (8-10 раз) и дополнительно обрабатывали ультразвуком (20 кГц, 30 с, 0°С). В дальнейшем суспендирование осадков при выделении ядерной РНК проводили только через иглу.