Sulfeto de hidrogênio durante o choque endotoxêmico: modulação da produção de PGD₂ na AVPO e de citocinas periféricas durante as fases de hipotermia e febre

Abstract

Orientador: Prof. Dr. Luiz Guilherme de Siqueira Branco. Ribeirão Preto 2017Autorizo a reprodução e divulgação total ou parcial deste trabalho, por qualquer meio convencional ou eletrônico, para fins de estudo e pesquisa, desde que citada a fonte. À meu orientador, Prof Dr Luiz Guilherme Branco, por todo o compromiso, dedicação, conhecimento, paciência e apoio.À minha familia que sempre é um estímulo, um apoio e uma fonte de inspiração na minha formação.À Faculdade de Medicina de Riberão Preto, seu corpo docente, seu pessoal administrativo e não docente, por ter me acolhido e ajudado.À Heloísa Della Coleta Francescato, por ser a melhor colaboradora, companheira e amiga neste processo; também pelo seu conhecimento, paciência e carinho.À Renato Neri Soriano, Glauce Do Nascimento, João Paulo Sabino, Clarissa Mota, Bruna Maitan, Flavia Turcato e Mauro ferreira por serem amigos e irmãos do doutorado que com conhecimento e bons momentos acompanharam todo o processo. As respostas termorregulatórias ao lipopolissacarídeo (LPS) são influenciadas por moduladores que aumentam (febrigênicos) ou diminuem (criogênicos) a temperatura corporal (T b ). Entre eles, o neurotransmissor gasoso sulfeto de hidrogênio (H 2 S) modula a inflamação sistêmica induzida por endotoxina em ratos, agindo como uma molécula anti-inflamatória e criogênica, embora os mecanismos subjacentes ainda sejam pouco compreendidos. Considerando que a endotoxina é um ligante para o receptor Toll-like 4 (TLR4) e que evidências recentes revelam um cross-talk entre a via de sinalização TLR e fosfo-Akt (p-Akt), o objetivo do presente estudo foi investigar se o H 2 S atua como um mediador antiinflamatório e antipirético durante as fases termorregulatórias que ocorrem no choque endotoxêmico (hipotermia e febre) induzido por lipopolissacarídeo bacteriano (LPS, 2,5 mg/kg intraperitoneal (ip)) através da modulação sobre a produção de prostaglandina D 2 (PGD 2 ) e a ativação de Akt na área pré-óptica ântero-ventral do hipotálamo (AVPO). A T b profunda de ratos mantidos a uma temperatura ambiente de 25 °C foi registrada antes e depois da inibição farmacológica da enzima cistationina β-sintase (CBS -responsável pela produção endógena de H 2 S no cérebro) usando aminooxiacetato (AOA, 100 pmol/1 μl intracerebroventricular (icv)), combinado ou não com a administração de LPS. Para esclarecer os mecanismos responsáveis por esses ajustes da resposta imune, foram determinados na AVPO os níveis de H 2 S, a produção de PGD 2 e o perfil de expressão das proteínas CBS, pAkt e p-CREB. Além disso, foi analisada a concentração de citocinas plasmáticas (IL-1β, IL-6, IL-10, TNFα, IFN-γ e IL-4). A injeção ip de LPS causou a hipotermia típica seguida de febre. A microinjeção icv de AOA não causou nenhuma alteração na T b nem na produção basal de PGD 2 durante a eutermia. Os níveis de H 2 S na AVPO aumentaram significativamente durante a hipotermia quando comparado com ratos eutérmicos e febris. Em ratos tratados com LPS, o AOA causou uma atenuação na queda da T b durante a fase de hipote...