Subcellular Distribution, Properties and Interrelationship of Oestrogen Receptors in Endometrium and Other Target Tissues

Abstract

More than half of the extranuclear receptor content of resting cells is associated with cytoplasmic structures. Subfractionation of mierosomes reveals a preponderance of "basic" (low electrophoretic mobility) receptor in rough endoplasmic reticulum. Surfynol-dithiothreitol extracts of smooth membranes are rieh in "acidic" (high electrophoretic mobility) receptor. Trypsin increases the yields up to seven-fold, and this increase is correlated (r = 0.993) with the acidic receptor content and S'^nucleotidase activity of these microsomal preparations. Acidic microsomal, "cytosolic" and nuclear receptor can be degraded to the "basic" variety by streptomyces hyaluronidase. All forms give rise to a tryptic fragment with unchanged affinity for oestradiol and dimerization ability. Basic receptor isolated after enzymatic conversion of acidic receptor is microheterogenous on isoelectric focüsing, but gives rise to only one precipitation arc versus the IgG fraction of a polyclonal antiserum. The precipitation arc can be recharged with labelled oestradiol and autoradiographed. Non-immune IgG's form (unspecific) soluble complexes with oestrogen receptors, but not with their tryptic fragments. The polyclonal antioestrogen receptor IgG fraction precipitates the oestradiol-tagged tryptic receptor fragment from all subcellular sources of all homologous (porcine) and heterologous (human, ovine, bovine, goat, rabbit, guinea pig, rat) target tissues tested. Organ specificity can therefore be excluded and a high degree of phylogenetic conservation of the oestrogen receptor's protein moiety is implied. The presence, in the immune IgG fraction, of steroid releasing antibodies, which apparently distort the binding site, should spur the search for monoclonal antibodies with similar properties. Subzelluläre Verteilung, Eigenschaften und Verwandtschaft der östrogenrezeptoren in Endometrium und anderen ZielorganenZusammenfassung: Mehr als die Hälfte des extranuklearen Rezeptorgehalts von ruhenden Zellen ist mit zytoplasmatischen Strukturen assoziiert. Nach Subfraktionierung von Mikrosomen wird in rauhem Ergastoplasma bevorzugt "basischer" (niedrige elektrophoretische Beweglichkeit) Rezeptor gefunden. Surfynol/Dithiothreitöl-Extrakte von glatten Membranen sind reich an "saurem" (hohe elektrophoretische Beweglichkeit) Rezeptor. Trypsin erhöht die Extraktionsausbeuten bis zum Siebenfachen in Korrelation (r = 0,993) zum Gehalt der Strukturen an saurem Rezeptor und ihrer 5 f -Nucleotidaseaktivität. Saurer Rezeptor aus Cytosol, Mikrosomen und Kernen wird durch Streptomyces-Hyaluronidase zur basischen Form abgebaut. Trypsin führt sowohl sauren als auch basischen Rezeptor in ein Fragment über, das eine unveränderte Affinität für Östradiol hat und noch dimerisieren kann. Durch enzymatische Umwandlung von saurem Rezeptor und anschließende Reinigung erhaltener basischer Rezeptor ist mikroheterogen in der isoelektrischen Fokussierung, bildet jedoch nur einen Präzipitationsbogen mit der IgG-Fraktion eines polyklonalen Antiserums. Das Immunpräzipitat kann ...

Retrieval of estradiol receptor in paraffin sections of resting porcine uteri by microwave treatment. Immunostaining patterns obtained with different primary antibodies

“…This may be related to additional, poorly understood functional roles of the different domains. Hormone status-dependent specific binding of steroid receptors to elements of the cytoskeleton (Campbell et al 1989;Akner et al 1990;Barsony and McKoy t992;Sierralta et al 1995), to stress proteins (Carson-Jurica et al 1990), to ribonucleoprotein particles (Sherman and Stevens 1984) or to cell membranes (Little et al 1972;Jungblut et al 1983;Szego and Pietras 1981;Pappas et al 1995), for example, may be responsible for the variations in epitope accessibility detected. The unmasking of uterine estradiol receptors with the microwave treatment alone apparently did not suffice for the complete retrieval of all their determinants.…”