Structural and functional properties of Bp-LAAO, a new l-amino acid oxidase isolated from Bothrops pauloensis snake venom

Rodrigues, Renata Santos; Silva, Juliana da; Boldrini-França, Johara; Fonseca, Fernando P.P.; Otaviano, A. R.; Silva, Flávio Henrique; Hamaguchi, Amélia; Magro, Ângelo J.; Braz, Antônio Sérgio Kimus; Santos, Jorge M.

doi:10.1016/j.biochi.2008.12.004

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“…O iminoácido sofre hidrólise não enzimática liberando o α-cetoácido e amônia. Uma meia-reação oxidativa completa o ciclo reoxidando FADH2 com o oxigênio molecular produzindo peróxido de hidrogênio (Figura 1) (CURTI et al, 1992;KOMMOJU et al, 2007;LI et al, 2008;RODRIGUES et al, 2009;SUN et al, 2010;ALVES-PAIVA et al, 2011;COSTA et al, 2014).…”

Section: As L-aminoácido Oxidases (Laaos)unclassified

“…As SV-LAAOs de diferentes espécies variam amplamente entre si em termos da massa molecular, especificidade por substrato, estabilidade, atividades enzimáticas e biológicas (DU; CLEMETSON, 2002;CISCOTTO et al, 2009;RODRIGUES et al, 2009;GUO et al, 2012, IZIDORO et al, 2014.…”

Section: Em 1944 Stumpf E Green Descreveram a Primeira L-aminoácido unclassified

“…No entanto, a deglicosilação não teve efeito sobre a atividade enzimática das LAAOs de B. pauloensis, B. jararaca, B. alternatus e B. moojeni (STABELI et al, 2004(STABELI et al, , 2007RODRIGUES et al, 2009;. CISCOTTO et al, 2009), o que estimula uma maior investigação sobre o papel da glicosilação em SV-LAAOs e os mecanismos correspondentes.…”

Section: Em 1944 Stumpf E Green Descreveram a Primeira L-aminoácido unclassified

“…Nos últimos anos, muitos estudos foram realizados a fim de desvendar as sequências de aminoácidos das SV-LAAOs KOMMOJU et al, 2007;JIN et al, 2007;RODRIGUES et al, 2009;CHEN et al, 2012). As análises comparadas dos clones dos cDNAs de algumas SV-LAAOs mostram que existem muitas similaridades entre elas (Crotalus adamanteus, Crotalus atrox,…”

Section: Em 1944 Stumpf E Green Descreveram a Primeira L-aminoácido unclassified

“…Bothrops moojeni apresentam identidade sequencial de 80%), e também com partes da monoamina oxidase humana, bacteriana e fúngica (referente aos aminoácidos que codificam para o sítio de ligação de FAD) RODRIGUES et al, 2009, IZIDORO et al, 2014.…”

Section: Calloselasma Rhodostoma Agkistrodon Halys Blomhoffii Trimeunclassified

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Caracterização funcional e estudo dos mecanismos de resposta ao dano celular causado por uma L-aminoácido oxidase de Calloselasma rhodostoma em linhagens celulares humanas

Costa¹

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As L-aminoácido oxidases (LAAOs) isoladas de peçonhas de serpentes são alvos de um grande número de pesquisas devido às suas inúmeras ações biológicas e farmacológicas. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar funcionalmente a Laminoácido oxidase da peçonha de Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO) por meio das atividades: bactericida, fungicida, leishmanicida, tripanomicida, citotóxica, inflamatória e análise da expressão de genes e proteínas apoptóticas. A CR-LAAO mostrou-se altamente citotóxica sobre as células tumorais HepG2 e HL-60, promovendo cerca de 80% de morte celular na maior concentração testada (100 µg/mL) e apresentou baixa toxicidade sobre células PBMC. Foi possível observar que a proteína induziu apoptose (AV+) em PBMC. Em HepG2, as menores concentrações (0,1-2,5 µg/mL) causaram apoptose (AV+), e as maiores (5-100 µg/mL) causaram apoptose/necrose (PI+/AV+). Em HL-60, as concentrações testadas (0,1-100 µg/mL) induziram apoptose/necrose (PI+/AV+). A expressão do gene FAS e ativação das caspases 8 e 3 determinou a ativação da via extrínseca da apoptose na linhagem HL-60. A CR-LAAO promoveu algumas alterações na modulação do ciclo celular, sendo que nas linhagens tumorais os atrasos se concentraram nas fases G0/G1 e S do ciclo celular. Ademais, a CR-LAAO mostrouse bactericida contra as cepas S. aureus e E. coli, com maior especificidade para a cepa gram-positiva (S. aureus). Em análises de microscopia de transmissão, foi possível observar um desmantelamento da parede celular bacteriana. Após 6h de pré-incubação com C. albicans, a CR-LAAO foi capaz de inibir 80% do crescimento da levedura. A CR-LAAO mostrou-se também um bom agente leishmanicida contra as espécies L. infantum chagasi (IC50=16,66 µg/mL) e L. braziliensis (IC50=24,47 µg/mL) e inibiu o crescimento da forma promastigota do Trypanosoma cruzi (IC50=196,8 µg/mL). Testes in vivo revelaram que a CR-LAAO promoveu inflamação local aguda, recrutando células inflamatórias como neutrófilos e induzindo a formação de citocinas (IL-6 e IL-1β) e mediadores lipídicos (LTB4 e PGE2). Os resultados obtidos sugerem que a CR-LAAO apresenta potencial biotecnológico evidente, com efeitos antiparasitários, fungicida, bactericida, bem como atividade antitumoral in vitro. Dessa forma, os resultados obtidos para a CR-LAAO fornecem subsídios importantes para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas de ação direcionada, como quimioterápicos e antimicrobianos mais eficazes.Palavras chaves: Calloselasma rhodostoma; L-aminoácido oxidase; apoptose; expressão gênica; atividade antiparasitária; bactericida; inflamação. L-amino acid oxidases (LAAOs) isolated from snake venoms are targets of a large number of researches due to their numerous biological and pharmacological actions. The objective of this study was to functionally characterize the L-amino acid oxidase from the venom of Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO) through the activities: bactericidal, fungicidal, leishmanicidal, trypanocidal, cytotoxic, inflammatory and analysis of gene expression and apoptotic pro...

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Section: As L-aminoácido Oxidases (Laaos)unclassified

Section: Em 1944 Stumpf E Green Descreveram a Primeira L-aminoácido unclassified

Section: Calloselasma Rhodostoma Agkistrodon Halys Blomhoffii Trimeunclassified

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Caracterização funcional e estudo dos mecanismos de resposta ao dano celular causado por uma L-aminoácido oxidase de Calloselasma rhodostoma em linhagens celulares humanas

Costa¹

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“Anatomical” View of the Protein Composition and Protein Characteristics for Gloydius shedaoensis Snake Venom via Proteomics Approach

Liu

Yang

Zhang

et al. 2010

The Anatomical Record

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The bioactive protein components from snake venom complexes have been utilized for studies of enzymology, structural biology, and pharmacology. The Gloydius shedaoensis snake (GSS) is the only snake species found exclusively at the Chinese Shedao (snake) Island in Dalian. To investigate the protein components of Chinese GSS venom (GSSV), we initialized a proteomic assay for GSSV by the combination of sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis with high-performance liquid chromatography (HPLC)-nanoelectrospray ionization tandem mass spectrometry (nESI-MS/ MS). Thirty gel bands visualized by Coomassie blue staining were excised and digested by trypsin. The tryptic-digested peptides were separated by HPLC and subsequently sequenced by nESI-MS/MS. Twenty-four types of proteins were identified by searching the mass spectrometry data against NCBInr database through TurboSequest Bioworks. The most abundant proteins are phospholipase A 2 , metalloproteinase, L-amino acid oxidase (LAAO), serine protease/thrombin-like enzyme. Except for 20 types of known snake venom proteins, the homolog peptides of hypothetical protein PFLC2230, LOC495267 protein, DEAD/DEAH box helicase-like, and pancreatic trypsin 1 from other organisms are matched for GSSV protein components. Mass spectrometric data also indicated that (i) dimerization happens to PLA 2 s as monomer and dimer of PLA 2 s coexist in GSSV and (ii) truncation or hydrolysis might happen to LAAOs as three molecular-weight-ranged LAAO species are present in GSSV. The results provide an ''anatomical'' view of the protein composition and important information for protein characteristics of GSSV. Anat Rec, 294:273-282, 2011. V V C 2010 Wiley-Liss, Inc.

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Purification, Characterization and Antibacterial Activity ofl-amino Acid Oxidase fromCerastes cerastes

Hanane-Fadila

Laraba-Djebari

2014

J Biochem Mol Toxicol

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Antibiotic resistance presents a real problem in which new antibacterial molecules from natural secretions could be beneficial in the development of new drugs. In this study, Cerastes cerastes venom was investigated for its antibacterial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria. The antibacterial activity was evaluated by measuring the halo inhibition and minimum inhibitory concentration (MIC). An L-amino acid oxidase (CcLAAO) was purified from this venom using three chromatographic steps; its homogeneity (60 kDa) was confirmed by SDS-PAGE. LC-MS/MS analysis of CcLAAO showed similarities with other LAAO enzymes from Echis ocellatus and Viridovipera stejnegeri venoms. CcLAAO presents an antibacterial activity against three bacterial strains (Staphylococcus aureus, Methicillin-resistant S. aureus, and Pseudomonas aeruginosa) with MIC values of 10, 10, and 20 μg/mL, respectively. However, no effect was observed against Escherichia coli and yeast strains. Kinetic parameters of CcLAAO evaluated on L-leucine at pH 8.0 and 20°C were Km = 0.06 mmol and Vmax = 164 mmol/min.

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Structural and functional properties of Bp-LAAO, a new l-amino acid oxidase isolated from Bothrops pauloensis snake venom

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Caracterização funcional e estudo dos mecanismos de resposta ao dano celular causado por uma L-aminoácido oxidase de Calloselasma rhodostoma em linhagens celulares humanas

Caracterização funcional e estudo dos mecanismos de resposta ao dano celular causado por uma L-aminoácido oxidase de Calloselasma rhodostoma em linhagens celulares humanas

“Anatomical” View of the Protein Composition and Protein Characteristics for Gloydius shedaoensis Snake Venom via Proteomics Approach

Purification, Characterization and Antibacterial Activity ofl-amino Acid Oxidase fromCerastes cerastes

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