A procura por novas tecnologias que possibilitem o uso de recursos renováveis para obtenção de energia vem crescendo nas últimas décadas, principalmente devido às mudanças climáticas e o futuro esgotamento das atuais fontes fósseis de energia. A produção de biogás por meio da digestão anaeróbia tem se mostrado uma ótima opção, não só para produção de energia, como também para manejo adequado de resíduos orgânicos. Existem diversas configurações de reatores que vêm sendo aplicados para melhorar a conversão da matéria orgânica em biogás -como hidrogênio e metano. Uma das opções de substrato para essa digestão é o glicerol bruto, principal subproduto do processo de transesterificação de óleos vegetais ou animais, na produção de biodiesel. O objetivo deste trabalho foi analisar o perfil de degradação do glicerol em quatro Reatores Anaeróbios Horizontais de Leito Fixo (RAHLF) instalados em série (R1, R2, R3 e R4), com alimentação contínua de 97% de esgoto sanitário e 3% de glicerol bruto (v/v). Foram quantificados DQO, Glicerol, pH e ácidos graxos totais em 17 pontos de coleta presentes ao longo dos reatores. Nas posições iniciais, centrais e finais de cada reator, foi possível verificar a elevada degradação do glicerol, em remoções totais de até 99,5%. Os demais parâmetros analisados possibilitaram a compreensão da degradação do glicerol bruto em cada segmento do reator, assim como a ação dos microrganismos envolvidos na digestão anaeróbia.