Small-scale preparation of 5′-nucleotides and analogs by carrot phosphotransferase

5'-Phosphorylation of natural nucleosides and their modified analogs by intact Erwinia herbicola cells: specificity with respect to donors and acceptors of phosphate group

“…Последнее особенно важно при фосфорилировании труднодоступных модифицированных нуклеозидов. В качестве биокатализаторов при ферментативном фосфорилировании нуклеозидов наиболее часто применяют нуклеозидфосфотрансферазы [2][3][4][5][6][7][8][9].…”

“…Нуклеозидфосфотрансферазы (КФ 2.7.1.77) катализируют трансформацию нуклеозидов в 5'-, 2'-или З'-моносфосфаты, используя в качестве доноров фосфатных групп некоторые низкоэнергетические MOHOэфиры фосфорной кислоты. Для синтеза 5'-мононуклеотидов, в том числе и модифицированных, пригодны препараты нуклеозидфосфотрансфераз, выделенные из моркови [3,4], проростков пшеницы [6,8] и различных бактерий [2,7]. Последние, на наш взгляд, являются более перспективными из-за простоты получения, поскольку в качестве ферментного препарата можно использовать целые микробные клетки [2,7,9].…”

“…Как видно из рисунка, в экспериментальных условиях, оптимизированных нами ранее для получения AMP из Ado и p-NPP [9], фосфорилирование Ado и гидролиз эквимолярного количества AMP протекают с одинаковой скоростью (составляющей 12 нмолей-мин -1 -мг -1 клеток). Судя по литературным данным, такое отношение нуклеозидфосфотрансферазной и фосфатазной активностей характерно для клеток и других бактериальных штаммов, использованных в качестве биокатализаторов при фосфорилировании нуклеозидов [2,5,10], и значительно отличается от растительных ферментных препаратов, где фосфатазная активность превосходит нуклеозидфосфотрансферазную в 10-40 раз [3,4,6,8]. Эти данные объясняют тот факт, что при синтезе 5'-мононуклеотидов растительными ферментами исследователи вынуждены вводить в реакцию донор фосфата по крайней мере в 15-кратном избытке по отношению к концентрации нуклеозида [3,4,6,8].…”

“…Интересно отметить, что изучаемый нами фермент, так же как нуклеозидфосфотрансфераза растений [3,19], оказался способным фосфорилировать нуклеозид в с.-конфигурации, причем с большей эффективностью, чем тот же нуклеозид в β-конфигурации (см. 3'F; 2', 3'ddAdo и α-3'F; 2', 3'ddAdo).…”

Convenient synthesis of nucleoside 5′-triphosphates for RNA transcription

“…To increase the synthetic selectivity, nucleoside and nucleotide kinases have also been explored. [14][15][16][17][18] Because of the drawbacks of enzymatic synthesis, such as the substrate specificity, yield and cost, chemical synthesis is still a better choice for preparing a large quantity of nucleoside triphosphates, especially those with modifications. 5,19,20 The 3 0 -and 2 0 -triphosphates are the major regioisomers and by-products in the 5 0 -triphosphate synthesis, and the mono-, di-and even oligo-phosphates can also form as undesired products during the triphosphate synthesis.…”